论文部分内容阅读
骨质疏松是以骨量减低,骨组织细微结构退变为特征的全身性疾病,可以导致骨脆性增加。骨质疏松的主要危害是导致骨折,造成病患身心创伤,降低生活质量,增加社会成本。今年来随着社会老龄化的加速,人口平均年龄的增加,老年性骨质疏松症发病明显增多,与此同时,由此造成的骨折发病率也呈明显上升势头,已经严重影响到了老年人的健康安全。骨质疏松形成的原因是骨吸收的增加以及骨生成的减少所造成的骨代谢负平衡。对于老年性骨质疏松而言,其由破骨细胞造成的骨吸收作用占主导地位。目前对于基因在生理及病理生理状态下对破骨细胞分化成熟的调控机制仍然不十分明确。miR-146a与免疫和炎性反应密切相关,其靶基因肿瘤坏死因子(TNF)受体相关因子6 (TRAF6)在破骨细胞融合成熟的过程中起着重要作用。同时由于miR-146a调控了炎性反应,间接参与了破骨细胞的分化过程。在本实验中,我们分别观察2月龄,6月龄,12月龄的miR-146a基因敲除小鼠的来模拟老年性骨质疏松症的发病过程,使用micro-CT技术,对小鼠腰椎以及胫骨松质骨相关参数进行检测,发现2月龄,6月龄小鼠松质骨量未减少,而12月龄基因敲除小鼠松质骨骨小梁数量减少,间距增宽,确定了该老年性骨质疏松模型的可靠性；使用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色技术对miR-146a敲除小鼠腰椎椎体内破骨细胞活性进行检测,在基因敲除小鼠中破骨细胞数量明显多于野生型小鼠体内的破骨细胞数量,表明miR-146a敲除可以增加破骨细胞生成能力；在使用免疫组织化学法对炎症相关的蛋白(TRAF6,IL-6,TLR4)以及破骨细胞分化蛋白(Nfatc1)、成骨细胞产生的蛋白(OPG, osteocalcin)进行检测,发现TRAF6, IL-6以及TLR4表达在miR-146a基因敲除小鼠中增高,Nfatc1表达也增高,而成骨相关指标降低；最后,通过体外骨髓来源单核细胞破骨细胞分化实验对破骨细胞成熟分化相关基因及蛋白进行检测,从而最终确定miR-146a通过调控RANKL/Nfatc1信号通路来控制破骨细胞由破骨细胞前体细胞融合分化成熟的过程。综上,miR-146a可以通过调控相关炎症通路从而调节RANKL/Nfatc1破骨细胞分化成熟信号通路,同时影响成骨细胞OPG蛋白信号通路,共同作用影响破骨细胞的分化过程。