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研究背景和目的目前，肺癌是全球肿瘤患者死亡的主要原因，其5年生存率仅为15%。探讨肺癌发病机制，寻找有效治疗靶分子成为研究肺癌的一个重要方向。现代基因学说认为肿瘤发生、发展与抑癌基因缺失密切相关。许多癌基因产物通过磷酸化激活细胞生长、粘附、迁移、浸润及拮抗凋亡等方面促肿瘤的发生、发展；因此，特异性的去磷酸化的磷酸酶可能成为一个抑癌基因。既往研究发现一个双重特异性磷酸酶PTEN在包括肺癌及多种肿瘤中表达缺失或突变而功能丧失，转染野生型的PTEN可明显抑制肿瘤细胞的生长，所以，已渐渐认可PTEN为重要的抑癌基因。虽然有文献报道肺癌组织中PTEN缺失，但是并不清楚肺癌细胞中PTEN缺失的详细分子机制。研究方法1. Western blot方法检测肺癌细胞和正常人肺上皮细胞BEAS-2B PTEN蛋白的表达；用放线菌酮处理人肺腺癌细胞A549和正常人肺上皮细胞BEAS-2B阻断细胞翻译后，Western blot方法检测不同时相PTEN蛋白的表达。RT-PCR检测肺癌细胞与正常肺上皮细胞PTEN mRNA水平；放线菌素D处理肺癌细胞与正常肺上皮细胞阻断新生RNA合成，RT-PCR检测不同时相PTENmRNA的水平。2.根据生物信息学筛选可能降解PTEN mRNA的microRNA，northern blot检测miRNA的表达。在肺腺癌细胞A549中转染miRNA抑制剂，RT-PCR法检测PTEN mRNA表达的变化；Western印迹法检测PTEN蛋白的表达；CCK-8法检测细胞的增殖状态。研究结果1. Western blot结果显示肺癌细胞中PTEN蛋白表达与正常肺上皮细胞比较有不同程度的降低；使用放线菌酮处理A549和BEAS-2B后，24小时内A549及BEAS-2B细胞PTEN蛋白表达无明显改变。RT-PCR结果显示肺癌细胞中PTEN mRNA与正常人肺上皮细胞相比明显降低；放线菌素D处理显示肺癌细胞PTEN mRNA降解速率比正常肺上皮细胞降解速率明显加快。2.人肺腺癌细胞转染miRNA抑制剂后，转染miR-103抑制剂组PTEN mRNA的表达量和蛋白水平较对照组出现明显升高，细胞增殖能力受抑制；转染miR-19a抑制剂组PTEN mRNA、PTEN蛋白的表达量均无明显改变，细胞增殖能力无明显改变；转染miR-92b抑制剂组PTEN mRNA的表达量无明显改变，PTEN蛋白的表达量略微升高，细胞增殖能力受抑制。研究结论1.肺癌细胞中抑癌蛋白PTEN低表达的主要原因是其mRNA降解加速。2.肺癌细胞中抑癌蛋白PTEN mRNA降解加速可能与miRNA相关。