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对虾白斑综合症(White Spot Syndrome,WSS)是目前危害对虾养殖业最为严重的病害之一,在世界范围内已造成了巨大经济损失,但目前仍未得到有效的防治。因此,寻找一种安全、简便、高效的防治方法,已成为解决该病害的关键。卵黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin,IgY)可用于治疗由细菌或病毒等多种病原体引起的人类及动物疾病,具有安全无残留、不产生抗药性、方便易得、稳定性高等优点,特别是可以应对复杂的水体环境,针对性地使无脊椎动物获得被动免疫保护,在防治一些水产动物疾病方面,具有广阔的应用前景。本研究对WSSV进行了扩增、分离、鉴定,以其DNA为模板,利用PCR技术分别钓取WSSV的主要致病蛋白基因VP28、VP19、VP15,并设计两条连接肽GGDAGD和GNSPNA,通过重叠延伸PCR技术将三段基因串联构成融合基因。将这些目的基因与真核表达载体pCI连接构建单一基因重组质粒pCI-28、pCI-19、pCI-15以及融合基因重组质粒pCI-28-19-15。通过原核细胞诱导表达和转染HeLa细胞使其表达目的蛋白,运用Western Blotting及间接免疫荧光反应检测DNA疫苗的免疫原性。结果表明,目的基因能够进行表达,并能够特异性的识别WSSV抗体。从而,证明了WSSV的DNA疫苗具有良好的免疫原性,可以表达出目的蛋白并对相应的抗体进行识别,为其作为抗原免疫蛋鸡奠定基础。以WSSV病毒灭活疫苗为对照,将上述制备的DNA疫苗作为抗原,胞嘧啶-鸟嘌呤(CpG)二核苷酸的寡核苷酸链(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODNs)作为DNA疫苗佐剂免疫蛋鸡,获取抗WSSV特异性卵黄抗体。通过间接ELISA法监测抗体活性,结果表明,CpG佐剂能够显著增强DNA疫苗的免疫性能(P＜0.05);以不同的抗原免疫蛋鸡均可获得特异性卵黄抗体,特异性IgY在110天仍保持较高的抗体活性;灭活疫苗组及DNA疫苗组的抗体活性与阴性对照组均有显著差异(P＜0.05)。融合基因DNA疫苗与单一基因DNA疫苗免疫产生的特异性IgY活性之间无显著差异;单一基因DNA疫苗免疫效果与其混合交叉免疫的效果也无显著差异;采用水稀释,两步盐析,超滤法从卵黄中分离纯化IgY,平均每枚蛋黄可以获得120mg以上的IgY,特异性IgY含量随时间变化趋势可以反映出抗体活性的变化。不同疫苗的抗体产物的总IgY含量基本一致;而特异性IgY含量则不同,DNA疫苗获得的抗体产物中特异性IgY含量明显高于对照,低于灭活疫苗。使用制备的IgY蛋白粉和卵黄粉,通过注射、口服、浸泡等方式系统地考察了抗WSSV的特异性卵黄抗体对实验动物被动免疫保护效果。体外中和注射实验结果表明,特异性IgY能够一定程度上抑制WSSV:在口服被动免疫实验中,1%灭活疫苗IgY蛋白粉的保护效果最佳,累计死亡率53.3%,口服10%灭活疫苗卵黄粉的保护效果其次,累计死亡率为66.7%;浸泡被动免疫实验中,灭活疫苗IgY浸泡组的死亡率为33.3%,DNA疫苗IgY浸泡处理组累计死亡率为80%,以上处理均与对照组呈显著性差异(P＜0.05),表明以注射、口服及浸泡方式,将制备的特异性IgY被动免疫克氏鳌虾,具有抑制WSSV的效果。综上所述,本研究制备的抗WSSV特异性IgY具有一定的被动保护作用,其作为一种新型的水产动物抗病毒免疫制剂,将具有良好的产业化前景。