论文部分内容阅读
目的:在胰腺导管腺癌(Pancreatic Ductal Adenocarcinoma,PDAC)中筛选差异性表达的细胞外基质蛋白;探寻SFRP4在PDAC组织以及血浆中异常表达的临床意义及与患者预后的关系;初步探索SFRP4影响的生物学过程及其分子机制。方法:利用表达谱芯片分析50例PDAC患者肿瘤与癌旁组织的基因表达,筛选差异性表达的细胞外基质蛋白(extracellular matrix,ECM),从中确定分泌蛋白SFRP4作为研究对象。进一步在Gene Expression Omnibus(GEO)数据库以及仁济医院样本库中通过实时荧光定量PCR以及免疫组化验证SFRP4在PDAC中的表达情况。通过组织芯片以及外周血样本,分析组织以及血浆中SFRP4表达与临床病理参数以及预后的关系。使用基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)寻找SFRP4影响的生物学过程。利用组织芯片分析SFRP4与调节性T细胞(Treg)的相关性并通过细胞趋化实验确定其在T细胞募集过程中的作用;最后使用双荧光素酶基因报告实验探究SFRP4对下游通路的影响。结果:利用仁济医院50例PDAC的表达谱数据,我们筛选出了276个肿瘤中表达上调的基因(FDR<0.00001且Fold change>3)以及88个肿瘤中表达下调的基因(FDR<0.00001且Fold change<0.3)。我们验证了SFRP4的高表达并通过组织芯片发现其表达水平与患者T分期显著相关(p=0.017),并且是胰腺癌的独立预后因素(HR=1.422,P=0.039)。我们也发现PDAC患者外周血中的SFRP4浓度明显升高,外周血中的SFRP4同样与不良的预后相关(p=0.046)。GSEA提示SFRP4表达与淋巴细胞的募集密切相关,我们通过组织芯片的相关性分析发现SFRP4高表达的病例中Treg细胞的浸润也随之增多。外周血单个核细胞的趋化实验证实了SFRP4的下调会减弱肿瘤细胞对于CD4阳性T细胞的募集能力。双荧光素酶报告基因实验证明SFRP4可以激活经典的Wnt/β-catenin通路。结论:ECM的表达改变是胰腺癌的一个重要特征。分泌蛋白SFRP4在PDAC中异常高表达,组织或是外周血中的SFRP4高表达提示患者病程相对较晚、预后更差。SFRP4与Treg细胞的浸润有关,其可以促进肿瘤细胞对于CD4阳性T细胞的募集。Wnt通路可以促进免疫细胞的募集以及分化,SFRP4可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进了Treg细胞的浸润。