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背景:树突状细胞(dendritic cell,DC)是专业抗原呈递细胞(antigen presenting cell,APC),并在调节固有免疫和特异性免疫系统中起着关键的作用。细胞成熟的过程伴随着识别病原体、上调MHC分子和共刺激分子、激活抗原特异性CD4+和CD8+T细胞。在早期的混合淋巴反应实验中,树突状细胞有效地诱导初始T细胞增殖的能力大约是其他APC(如巨嗜细胞)的100倍。环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)是一种环状核苷酸,在细胞内充当第二信使并可以调节细胞的各种活动。免疫细胞中的c AMP的升高通常有着抑制炎症反应的作用。而树突状细胞中的c AMP可以抑制树突状细胞的提呈抗原功能,并阻断自身免疫和炎症反应。现有研究已证明小鼠的树突状细胞中有多种谷氨酸受体(glutamate receptors,Glu Rs)表达,谷氨酸信号通路与其c AMP的水平及细胞因子的分泌有关。因此,研究人树突状细胞中谷氨酸信号通路与c AMP的关系有重要的免疫学意义.目的:建立人树突状细胞体外培养体系并探讨代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,m Glu R4)在树突状细胞及免疫系统中所起的作用及其相关机制。方法:1.使用密度梯度离心法从外周富集血中分离提取单个核细胞(PBMC),加入GM-CSF及IL-4诱导其分化为未成熟树突状细胞,使用“细胞因子鸡尾酒”(PGE2、IL-6、L-1β、TNF-α)刺激其成熟。2.流式细胞术检测树突状细胞表面标记物HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CD1a及CD14的表达。3.使用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)及荧光实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法检测树突状细胞中m Glu R4的表达。4.用酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)法检测树突状细胞加入m Glu R4激动剂L-(+)-2-Amino-4-phosphonobutyric acid(L-AP4)前后细胞内环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,c AMP)的表达。结果:1.倒置相差显微镜观察提取的单核细胞成功分化成树突状细胞。2.流式细胞术结果显示培养出的树突状细胞高表达HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CD1a,符合成熟树突状细胞的特性。3.PCR结果显示成熟的树突状细胞存在代谢型谷氨酸受体4的表达。4.树突状细胞接受L-AP4的刺激后,在L-AP4为5μM浓度时,树突状细胞内c AMP表达水平降低,但P>0.05,没有统计学意义。当L-AP4达到10μM时,c AMP表达水平降低,且P<0.01,存在统计学差异。结论:1.人树突状细胞中表达代谢型谷氨酸受体4。2.代谢型谷氨酸受体4可降低人树突状细胞内环磷酸腺苷的浓度。