【摘 要】
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随着动植物新病虫害的不断发生,同时各种耐药细菌不断出现,使得新药、新抗生素的开发需求迫切。寻找具有生物活性的放线菌,并深入研究次级代谢产物,有利于丰富药物筛选资源库
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随着动植物新病虫害的不断发生,同时各种耐药细菌不断出现,使得新药、新抗生素的开发需求迫切。寻找具有生物活性的放线菌,并深入研究次级代谢产物,有利于丰富药物筛选资源库,对于新抗生素的发现具有重要的意义。本研究从采集自江西九江、湖南永州的各类生境的土壤中分离筛选得到了17株放线菌,并选择了其中一株拮抗活性表现最好的菌株NF-1222进行了生理生化和16S rDNA分子鉴定,将其命名为Streptomyces endus NF-1222。对放线菌Streptomyces endus NF-1222进行发酵,然后采用硅胶层析、凝胶层析及液相色谱分离纯化次级代谢产物,得到4个化合物,经IR、MS和NMR等波谱数据分析鉴定了这4个化合物的化学结构,分别为:潮霉素A(NF1222-1)、3-(N-ethyl acetamide)-indole(NF1222-2)、Ring(L-leucyl-L-valine)(NF1222-3)和Ring(L-prolyl-L-leucyl)(NF1222-4),确定了该放线菌株产物的活性成分为潮霉素A。为了进一步挖掘放线菌Streptomyces endus NF-1222的代谢潜力,本研究将具有全局性正调节功能的基因adpA在该放线菌株中进行过表达,以尝试激活沉默基因,获得新的次级代谢产物。从糖多孢红霉菌Saccharopolyspora erythraea中PCR扩增获得了大小为1245 bp的基因adpA并构建了整合型过表达质粒pQH17,进行接合转移,挑选接合子获得了60株重组菌株。进一步对重组菌株进行发酵、代谢产物HPLC分析,得到了1株可以产生新的液相峰(相比于出发菌株)的菌株Streptomyces endus NF-1222A。对重组菌株进行发酵,并分离提取其产生的新的液相峰对应的化合物(NF1222A-1),鉴定该化合物结构,发现其为新的O-肉桂酰苏氨酸衍生物(O-cinnamoyl threonine derivative)。此外,还分离到1个已知化合物:D-neo-Inositol,5-deoxy-5-[[(2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2--methyl-1-oxo-2-propen-1-yl]amino]-1,2-O–methylene(NF1222A-10)。进一步对新化合物(NF1222A-1)进行抗菌、抗肿瘤、杀虫杀螨活性检测,发现该化合物有杀螨活性。本研究表明通过在放线菌中过表达全局性正调控基因adpA可以激活非常规的或处于沉默状态的次级代谢通路,使突变株产生新的次级代谢产物,有利于对已有的放线菌资源进行深入挖掘。
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