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文章从以下三个实验,就线粒体融合蛋白2在绒毛组织中的表达及其与胚胎发育相关性的探讨进行了综述。 实验一Mfn2在正常早孕妇女及不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中的定位及定量表达,初步探讨Mfn2与胚胎发育的相关性 目的:检测线粒体融合蛋白2(Mitofusin2,Mfn2)在正常早孕妇女及不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中的定位及定量表达,初步探讨其与胚胎发育的相关性。 方法:采用免疫组织化学法(Immunohistochemistry, IHC)和荧光定量逆转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcript polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测Mfn2在30例正常早孕妇女及35例不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中的表达情况。 结果:Mfn2在正常早孕妇女及不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中均有表达,主要分布在绒毛滋养层细胞(villus trophoblastic cells)的胞浆中,以细胞滋养层细胞(cytotrophoblast)中更为明显,不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中Mfn2 mRNA的相对表达量显著低于正常早孕妇女(P<0.01)。 结论:Mfn2定位于人胚胎绒毛滋养层细胞胞浆中,且在不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中的相对表达强度显著弱于正常早孕妇女,提示Mfn2可能与胚胎发育有关,一定量的Mfn2表达有助于正常早孕的维持。 实验二 Mfn2与胚胎发育过程中绒毛滋养层细胞凋亡相关性的探讨 目的:研究正常早孕妇女及不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中细胞凋亡情况及Mfn2、B cell lymphoma-2(Bcl-2)和Bcl-2 Associated X Protein(Bax)的蛋白表达情况,探讨Mfn2与胚胎发育过程中绒毛滋养层细胞凋亡的相关性。 方法:采用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位末端标记法(Terminal-deoxynucleoitidyl Transferase Mediated Nick End Labeling, TUNEL)和蛋白印记(western blot)检测实验一中12例正常早孕妇女及12例不明原因胚胎停育者绒毛组织中的细胞凋亡情况及Mfn2、Bcl-2和Bax的蛋白表达情况。 结果:不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中滋养层细胞凋亡指数(Apoptosis index, AI)明显高于正常早孕妇女(P<0.05)。Mfn2及Bcl-2蛋白在不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中的相对表达显著低于正常早孕妇女(P<0.01),而前者绒毛组织中Bax蛋白的相对表达显著高于后者(P<0.01)。 结论:与正常早孕妇女相比,不明原因胚胎停止发育者绒毛滋养层细胞凋亡明显增加,且正常早孕妇女及不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中Mfn2的相对表达与Bcl-2呈正相关,与Bax呈负相关,提示Mfn2可能通过调节滋养层细胞凋亡参与胚胎发育过程。 实验三 Mfn2与胚胎发育过程中线粒体改变的相关性探讨 目的:观察正常早孕妇女及不明原因胚胎停止发育者绒毛滋养层细胞超微结构,检测绒毛组织中三磷酸腺苷(adenosine5’-triphosphate, ATP)含量,探讨Mfn2在胚胎发育过程中对线粒体代谢的影响,从而揭示Mfn2在胚胎发育中的作用机制。 方法:利用透射电镜(Transmission Electron Microscope, TEM)检测相同孕周8例正常早孕妇女及8例不明原因胚胎停止发育者新鲜绒毛滋养层细胞超微结构。磷钼酸比色法检测2组绒毛组织中ATP含量。 结果:正常早孕妇女胚胎绒毛滋养层细胞中线粒体形态规则,轮廓光滑完整,线粒体嵴排列基本规则,内质网扩张明显,内质网内蛋白分泌明显增多;不明原因胚胎停止发育者绒毛滋养层细胞中线粒体轮廓模糊、断裂,线粒体嵴排列紊乱,线粒体内出现空泡,并有“髓鞘样改变”,与正常早孕妇女胚胎绒毛滋养层细胞相比,内质网扩张不明显。且不明原因胚胎停止发育者绒毛组织中ATP含量明显低于正常早孕妇女(P<0.05)。 结论:与正常早孕妇女相比,不明原因胚胎停止发育者绒毛滋养层细胞中线粒体断裂明显,功能性蛋白分泌减少,且ATP产生减少,提示Mfn2可能通过线粒体途径调节细胞能量代谢,参与胚胎发育过程,Mfn2低表达可能与胚胎停止发育有关。