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酵母菌是我国重要的微生物资源,在我国已有两千多年的使用历史。但是关于酵母菌的分类鉴定,特别是属以下种的分类鉴定存在很多争议和混乱,这对于酵母菌的研究和应用是很不利的。Y-氨基丁酸(GABA)是广泛分布于动植物中的一种天然活性成分,具有降血压、镇痛、改善脑机能、精神安定、促进长期记忆等多种生理功能。GABA的研究开发已经成为新的热点,通过筛选优良、高产、安全的酵母菌等微生物菌株,发酵生产富含GABA功能性食品配料,其产品具有成本低、含量高及可安全用于食品的优点。本研究以能产生GABA的酵母菌为研究对象,从形态学、分子生物学等方面探索了产生GABA酵母菌菌种的鉴别方法,以期为酵母菌菌种鉴别和亲缘关系研究提供借鉴。具体结果如下：1.从各种不同水果表皮和不同场所的自然环境中分离得到256株纯的酵母菌株,筛选得到能产GABA的酵母菌株17株,另外索要和购买了2株参照菌株。以这19株酵母菌株为研究对象,通过传统的形态学分类鉴定方法,依据《酵母菌的特征与鉴定手册》,将19株酵母进行初步分类鉴定,结果如下：Y-5、Y-8、Y-9、Y-10、Y-11、Y-16、Y-17和Y-19为啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae);Y-6、Y-13为红酵母(Rhodotorula glutinis);Y-14和Y-18为红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides);Y-2、Y-4和Y-7为乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis);Y-3和Y-15为葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum);Y-12为地生酵母(Saccharomyces telluris)。2.从27条ISSR引物中筛选得到10条引物,共扩增出108条谱带,其中90.7%呈多态性。以ISSR-PCR扩增的产物图谱为依据,对供试的19个酵母菌株进行聚类分析。在相似水平为0.69处,19个酵母菌株可以划分为5个群,第Ⅰ群：Y-1,Y-3,Y-5,Y-10,Y-19,Y-8,Y-16,Y-17,Y-9,Y-11；第Ⅱ群：Y-2,Y-4,Y-7；第Ⅲ群：Y-6,Y-13,Y-18,Y-14；Y-15和Y-12酵母分别代表一个群。3.从88对SRAP引物中筛选得到了14对引物用于实验。总共扩增出279条谱带,其中92.5%呈多态性,每对引物平均扩增出20条谱带。根据SRAP-PCR的扩增图谱,对供试的19个酵母菌株进行聚类分析。在相似水平为71%处时,供试的19株酵母菌株被划分为四个类群,第Ⅰ群：Y-6,Y-18,Y-14,Y-7,Y-2,Y-4；第Ⅱ群：Y-12；第Ⅲ群：Y-3,Y-11,Y-16,Y-5,Y-8,Y-13,Y-17,Y-1,Y-19,Y-10,Y-9；第Ⅳ群：Y-15。4.对供试的19株酵母菌株的5.8S rDNA-ITS区域进行PCR扩增,对未纯化的PCR产物进行ITS区域的测序,通过Blast比对,对供试的19株酵母菌株进行鉴定：Y-1,Y-3,Y-5,Y-8,Y-9,Y-10,Y-11,Y-16,Y-17,Y-19为啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae);Y-2,Y-4,Y-7为乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis);Y-6,Y-13,Y-14,Y-18为粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa);Y-15为梅奇酵母(Metschnikowia);Y-12不能确定。5.结合形态学初步鉴定、ISSR、SRAP分子标记技术和5.8S rDNA-ITS区序列测定结果,将19株供试酵母鉴定为：Y-1,Y-3,Y-5,Y-8,Y-9,Y-10,Y-11,Y-16,Y-17和Y-19酵母为啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae);Y-2,Y-4和Y-7酵母为乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis);Y-6,Y-13,Y-14和Y-18酵母为粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa);Y-15酵母鉴定为葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum),Y-12酵母鉴定为地生酵母(Saccharomyces telluris)。本研究结果显示,ISSR、SRAP和ITS序列分析均能在一定程度上对不同种的酵母菌进行区分,但每种技术都有其优缺点,单独使用的时候不能完全将菌株进行分类鉴定,因此,应将各种相互结合,相互验证,以获得更加可靠的分析结果。