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微生物是天然先导药物的重要来源之一。鉴于微生物间的自然相互作用、模拟微生物种群间营养和空间竞争是诱导产生活性次生代谢产物的主要途径,微生物共培养已经成为提高生产效价和发现新化合物的重要方法,是工业、农业、医药、食品及环保等领域的热点问题。本课题以两株药用植物黄花蒿(Artemisia annua Linn.)来源两株内生真菌sps-02(Aspergillus fumigatus)和sps-03(Fusarium oxysporum)为对象,通过混合培养研究及其发酵次生代谢产物探索,以期获得更多的活性天然产物。内生烟曲霉在世界范围内广泛存在,宿主植物包括黄花蒿(Artemisia annua)、杜仲(Eucommia ulmoides)、狗牙根(Cynodon dactylon)、嘉兰(Gloriosa superba)、无花果(Ficus carica)和苦楝(Melia azedarach),这些内生烟曲霉在微生物形态学上趋于一致,能够适应高温(30-40℃),且均有化学成分的研究报道;内生尖孢镰刀菌的宿主植物研究包括大叶苹果(Malus pumila)、大叶醉鱼草(Buddleja davidii)和垂枝柏(Juniperus recurva),苹果和大叶醉鱼草的内生尖孢镰刀菌主要报道和研究其粗提物活性,垂枝柏内生尖孢镰刀菌报道发现了1种活性代谢产物。本试验采用抗菌活性追踪为导向、代谢产物化学成分筛选出第一种共培养条件:采用液体察氏液体培养基(高盐),将两菌单独培养3 d,后将sps-02和sps-03以1:4比例混合,共培养7d。发酵至60L,萃取总代谢产物,产量为3.2g。以第一种共培养条件为基础,进行HPLC分析,获得第二种共培养条件:采用察氏液体培养基,将单独培养的sps-03发酵液2m L加入装有250m Lsps-02发酵液的500m L三角瓶中,共同培养7d。发酵至50L,萃取总代谢产物,产量为2.0g。利用UV-HPLC分离得到7个代谢产物,采用现代波谱技术(ESI-MS、1H-NMR等),确定了5个化合物化学结构,分别为:9-ethyladenine-1-oxide(1)、Tyrosine(2)、Tryptophan(3)、diisobutyl phthalate(4)、Tricycloalternarene 3b(7),化合物5和6为Tricycloalternarene的衍生物。本研究为微生物共培养及其次生代谢产物的分离提供了参考,特别是采用“一菌多物”(One Strain Many Compounds,OSMAC)的研究思路,可以获得更多的活性天然产物。