论文部分内容阅读
目的：1.观察chemerin及其受体chemerinR基因在小鼠各脏器中的表达情况；探讨3T3-L1脂肪细胞分化成熟过程中chemerin及其受体基因表达的变化。2.探讨PPAR-γ激动剂——罗格列酮对3T3-L1脂肪细胞chemerin及其受体基因表达的影响。3.重组chemerin蛋白对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响并观察其对脂联素、瘦素和PPAR-γ2等基因表达的影响。方法：1.提取正常小鼠肝脏、脂肪、胃、脾脏、肾脏、心脏、骨骼肌等脏器组织中总RNA,采用半定量RT-PCR技术检测其中chemerin及chemerinR基因表达水平；体外培养3T3-L1前脂肪细胞并诱导分化,实时荧光定量PCR法检测诱导分化过程中不同天数(0、2、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因的表达变化。2.3T3-L1细胞诱导分化至第10天为正常对照组；另一组在诱导分化过程中用10μM罗格列酮干预。采用实时荧光定量PCR法检测不同天数(0、2、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因表达情况。3T3-L1脂肪细胞诱导成熟后,分别以不同浓度梯度(0、0.μM、1μM、10μM)的罗格列酮干预24小时后收集细胞,实时荧光定量PCR法检测chemerin和chemerinR基因的表达情况。3.3T3-L1细胞诱导分化至第10天为正常对照组；一组诱导分化过程中用罗格列酮干预；另一组予以chemerin蛋白干预。采用实时荧光定量PCR法检测第10天PPAR-γ2、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因表达情况。3T3-L1细胞诱导成熟后,分别以不同浓度梯度(0、2.5ng/m1、25 ng/ml、50 ng/m1)的chemerin蛋白作用24小时后收集细胞,实时荧光定量PCR法检测PPAR-γ2、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因的表达情况。结果：1、chemerin及其受体基因在小鼠肝脏、脂肪、胃、脾脏、肾脏、心脏、骨骼肌中均有表达；chemerin及chemerinR基因低表达于3T3-L1前体脂肪细胞中,并随前体脂肪细胞诱导分化成熟表达水平呈逐渐上调趋势(P<0.05)。2、与对照组相比罗格列酮组对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中及成熟的3T3-Ll脂肪细胞chemerin和chemerinR基因均起上调作用(P<0.05)。3、与对照组相比在3T3-L1细胞诱导分化过程中第10天罗格列酮干预组、chemerin蛋白组均上调PPAR-γ2、C/EBPa、adiponectin、leptin基因的表达(p＜0.05)。3T3-L1细胞诱导分化成熟后,与对照组相比chemerin蛋白组上调了PPARγy 2、C/EBPa及adiponectin、leptin基因的表达(p<0.05)。结论：1.chemerin及其受体基因在小鼠脂肪组织中均有表达；在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中,chemerin及其受体基因表达逐渐上调。2.PPAR-Y激动剂-罗格列酮上调chemerin、chemerinR基因的表达。3.chemerin蛋白上调成熟3T3-L1脂肪细胞中PPAR-γ2、C/EBPa及adiponectin、leptin基因的表达。