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在裂殖酵母中,Dnt1主要定位在核仁里,在有丝分裂后期还定位在纺锤体上。本实验室之前的研究发现,Dnt1对于纺锤体检验点的沉默是必需的;另外Dnt1通过下调Wee1蛋白水平调控细胞G2/M转换以及胞质分裂。 本研究通过对染色体分离情况的精确观察,我们发现Dnt1与Monopolin蛋白(Pcs1/Mde4)、Aurora B激酶Ark1分别通过不同途径防止姊妹染色体的merotelicorientation,在染色体准确分离过程中起着重要作用。利用nda3-KM311 cdc13-GFPark1-as3纺锤体检验点沉默筛选系统,我们进一步确认Dnt1与SAC的关键组分Bub3在不同的通路上调控检验点沉默,而且首次发现Dnt1可能与E2泛素偶联酶Ubc11在同一条通路上共同调控检验点沉默。 通过将dnt1+序列中潜在的11个Cdk1激酶磷酸化位点进行突变模拟非磷酸化状态的Dnt1,以此观察Dnt1磷酸化的效应。我们发现此突变株中染色体分离和纺锤体组装检验点沉默均有缺陷,因此推测Dnt1的磷酸化对于其功能的正常发挥是必需的。 通过细胞生物学定位研究以及生化分析,我们发现Plo1下调Wee1蛋白水平,并且发现把持续表达激酶活性的Plo1强制定位到SPB上能够加快Wee1的降解,并且能够逆转dnt1+缺失带来的细胞变长以及Wee1蛋白水平上调的效应,逆转dnt1△细胞中G2/M过渡的缺陷,暗示Plo1调控的Wee1的降解可能是发生在SPB上,而Dnt1可能通过影响Plo1在SPB上的定位从而调控G2/M过渡。 综上所述,本研究初步探索了裂殖酵母中Dnt1参与G2-M期有效过渡和纺锤体沉默、染色体准确分离等过程中可能的调控机制,从而为有丝分裂精准性的保障机制研究提供重要的借鉴。