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背景子宫内膜癌(EC)是最常见的女性生殖道恶性肿瘤之一。近年来,随着妇女人均寿命的延长、肥胖人数的增加等因素,子宫内膜癌发病率在各年龄层妇女中均呈上升趋势。目前认为子宫内膜癌的发生可能与长期无拮抗的雌激素作用有关。磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)介导的信号通路是细胞内重要的信号转导通路。AKT是PI3K/AKT信号转导通路的核心,与细胞的凋亡、增殖、分化和代谢等密切相关。核因子kB (nuclear factor-kappa B, NF-k B)是一种目前较为重视的关键性的细胞核转录因子,参与细胞凋亡以及肿瘤的发生和转移等多种的基因调控。目的为探讨雌二醇能否在子宫内膜癌中通过丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶(AKT)介导激活核转录因子(NF-k B)信号通路产生血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白细胞介素8(IL-8),以及其相关的细胞内信号通道的激活和传导机理,本研究以雌二醇及其相关信号通路抑制点的抑制物刺激人子宫内膜癌细胞株,包括ER弱阳性的HEC-1A及ER阳性的Ishikawa后VEGF> bFGF、 IL-8基因mRNA及蛋白表达变化情况,并在动物实验中观察雌激素作用子宫内膜癌Ishikawa细胞的裸鼠皮下移植瘤后NF-kB信号通路的分子变化,从体内、外两方面阐述雌二醇在子宫内膜癌发生中与AKT、NF-k B的关系。方法1、采用荧光定量PCR技术,检测空白对照组,或以1X10-66mol/L浓度的雌二醇(E2组)刺激人子宫内膜癌HEC-1A、 Ishikawa细胞30min后,或以1×10-6mol/L浓度的ER抑制剂(ER抑制剂组)、25×10-6mol/L浓度的AKT抑制剂(AKT抑制剂组)、100μmol/L浓度的NF-kB抑制剂PDTC(NF-k B抑制剂组)预处理Ishikawa. HEC-1A细胞1h,再以浓度为1X10-6mol/L雌二醇共同孵育30min,检测细胞因子VEGF.bFGF和IL-8mRNA表达变化的情况。2、采用Western Blot技术,检测空白组,或以1X10-6mol/L浓度的雌二醇刺激Ishikawas、HEC-1A细胞30min,或以1X10-6mol/L浓度的ER抑制剂(ER抑制剂组)、25X10-6mol/L浓度的AKT抑制剂(AKT抑制剂组)、100μmol/L浓度的NF-kB抑制剂PDTC (NF-k B抑制剂组)预处理Ishikawa、 HEC-1A细胞60min后,再以浓度为1X10-6mol/L雌二醇共同孵育30min,检测VEGF、 bFGF蛋白表达的变化情况。3、建立子宫内膜癌Ishikawa细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,以雌二醇(E2组)或雌激素受体阻滞剂ICI182,780氟维司群(ER组)、AKT抑制剂(AKT组)、NF-k B抑制剂PDTC (NF-k B组)分别预处理荷瘤裸鼠,连续腹腔给药21天后,处死裸鼠,根据瘤体体积。质量、抑瘤率等绘制生长曲线图。采用HE染色观察,并用免疫组化SP法检测各瘤体中AKT、 NF-k B、 VEGF、 bFGF的表达。结果1、 q PCR结果表明,与空白组比较,雌二醇刺激后子宫内膜癌细胞内VEGF、 bFGF和IL-8基因mRNA表达上调(P均<0.05)；ER抑制组、AKT抑制组及NF-kB抑制组VEGF、bFGF和IL-8因子mRNA和蛋白相对表达量与E2组比较显著下降(P均<0.05)。2、Western Blot结果表明,雌二醇作用后与空白对照组相比较VEGF、 bFGF蛋白相对表达量明显增高(P均<0.05),ER抑制组、AKT抑制组及NF-kB抑制组VEGF、 bFGF蛋白相对表达量与E2组比较显著下降(P均<0.05)3、动物实验结果表明,ER抑制剂组、AKT抑制组、NF-kB抑制组的相对肿瘤体积(V/VO)分别为5.32±0.28、5.55±0.15和1.57±0.23,与雌激素组(V/VO为11.37±0.37)相比较差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组化结果显示E2可诱导裸鼠子宫内膜癌皮下移植瘤的VEGF、bFGF表达上调(P<0.05)。ER抑制剂、AKT抑制剂、NF-kB抑制剂可阻断信号通路,遏制VEGF、 bFGF表达上调(P<0.05)。结论雌二醇通过激活E2-AKT-NF-k B信号通道,介导子宫内膜癌细胞产生VEGF、 bFGF、 IL-8.