转C4光合酶基因水稻的光合特性及生理机制研究

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高等植物在光合类型上可分为C3、C4、CAM三大类。C4和CAM植物是在逆境条件下经过长期驯化,从C3植物进化而来的。与C3植物相比,C4植物由于具有CO2浓缩机制,能在高光强、高温及低浓度CO2、干旱等条件下,比C3植物有较高的光合速率和营养、水分利用效率。二十世纪末,随着转基因技术的快速发展,以农杆菌为介导已成功地将来自玉米编码C4光合途径关键酶PEPC,PPDK,NADP-ME的基因分别转入水稻中,获得了不同的高表达的转基因水稻材料。通过对C4途径有关光合酶活性、光合作用对光的响应和光抑制/光氧化条件下的叶绿素荧光特性等生理指标的比较,研究了转C4光合酶基因水稻的生理特性。转C4光合酶基因水稻中,其相应的酶活性确实得到了高表达。转PPDK、PEPC光合酶基因水稻的饱和光合速率比原种高,其中转PEPC基因水稻的光饱和点比原种高200μmol m-2s-1,饱和光合速率比原种高53.1%;而转ME基因水稻的饱和光合速率略低于原种。在高光强(3h)或光氧化剂甲基紫精(MV)处理后,与原种相比,转PEPC酶基因水稻的PSⅡ光化学效率(Fv/Fm)、实际光化学效率(FPSⅡ)和光化学猝灭(qP)下降得较少,证明其耐光抑制和耐光氧化能力增强。而转ME基因水稻的Fv/Fm、F PSⅡ和qP下降的幅度高于原种,表明其易遭受光抑制和光氧化伤害。进一步用杂交的方法将ME基因转入PEPC+PPDK双基因水稻,测定了不同转C4光合酶基因水稻的C4光合酶活性、光合速率以及活性氧代谢有关指标,发现原种中具有全套的C4光合酶,但活性很低,而不同转C4光合酶基因水稻高表达了相应的C4酶活性。在高光条件下,与原种相比较,转PPDK基因水稻的光合速率未增加;转ME基因水稻的光合速率降低了7.6%;转PEPC基因水稻的光合速率增加了52.1%,转PEPC+PPDK双基因水稻与转PEPC基因水稻相近。ATP处理后,可显著提高转PEPC+PPDK双基因水稻和转PEPC+PPDK+ME基因水稻的光合放氧速率,后者达到玉米的82%,显现出类似C4的光合特点,表明ATP是构建C4水稻的关键因子。光氧化条件下,转PEPC+PPDK+ME基因水稻的耐光氧化能力得到进一步的增强。对不同转C4光合酶基因水稻的生理特性研究,发现转PEPC基因水稻显著地增加光合能力。本文进一步研究转PEPC基因水稻的光合保护能力,看到玉米PEPC基因导入水稻后,在高光强下光合速率提高50%,光合作用的光抑制减轻。用PEPC的专一抑制剂证明光合的增加确实是与PEPC基因的导入有关。不同基因型水稻在高光高温自然条件下中午均有光抑制现象,其中转PEPC基因水稻中午Fv/Fm降低较少,光抑制较轻,光能转化为化学能的效率较高,热耗散较低。继续将转PEPC基因水稻经过世代繁殖,逐代检测、选择,得到第8代稳定的种质。通过测定运用稳定和放射性碳同位素、光合速率和荧光特性,结果表明该种质为C3植物,但C4原初光合产物增多,表现出C4光合特性有所改善;转PEPC基因水稻是具高光效、耐光氧化并且其优良的光合特性能稳定遗传的种质,为我国的高光效育种提供了一个新的种质资源。以转PEPC基因水稻种质为父本,与粳稻9516杂交得到F1代,再进行花粉培养,经过光合及酶活性筛选后,再经过4年的定向筛选和监测,得到稳定的花粉株系JAAS45。通过对JAAS45与亲本不同生育期的光合色素含量、净光合速率和水分利用效率的研究,发现JAAS45随着发育阶段的推进,到分蘖期以后,JAAS45的单位叶面积Ch1和Car含量超过9516,并一直维持着较高水平,与PC相近。JAAS45苗期的净光合速率(Pn)与9516相近,而到了分蘖期,其Pn超过了9516,尤其到了抽穗及灌浆期其Pn还超过了PC。从苗期到抽穗期,JAAS45的水分利用效率(WUE)明显高于9516,与PC相接近。说明JAAS45已与父本PC接近,不仅有较高的Pn和较强的抗光抑制能力,而且还能充分利用早晨和傍晚较弱的光强进行光合作用。此外,JAAS45在生长发育期具有较高的WUE,有利于节约农业用水。另外,JAAS45抗光氧化研究发现,光氧化处理后,与其母本9516相比,JAAS45的Fv/Fm、FPSⅡ和qP下降的较少,而qN增加的较多,说明在光氧化条件下,JAAS45吸收的光能中有较多的光能转化为化学能,过剩的光能通过热耗散而减轻光破坏;同时JAAS45的内源活性氧清除酶系超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)诱导的活性高于母本9516,从而有效清除水稻叶片内的活性氧O2T,使活性氧积累较少,因而膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)产生较少,表明JAAS45耐光氧化能力较强。在光氧化条件下,JAAS45的叶绿素和蛋白质含量比9516下降较少,与父本相接近,表现出耐光氧化特性。对JAAS45及父母本进行PCR检测和PEPC酶活性的测定,并测定叶片CO2交换和荧光指标,显示父本的PEPC基因能稳定传递和遗传到杂交后代JAAS45中,且JAAS45具PEPC高表达的特性,在光合特性上表现有较多的饱和光合速率、量子效率、Fv/Fm、qP和非光化学淬灭(qN),具耐光抑制和光氧化的特性。用饲喂C4光合原初产物OAA、MA和PEP,证明它具有有限的C4光合微循环。该研究阐明了转PEPC基因水稻的生理遗传特点,为常规育种和生物技术的结合育种途径提供了依据。
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