【摘 要】
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在工程菌MM2,即E.coli TK1046(pMM-CTB)中,CTB基因的上游有两个启动子:lac启动子和ctb启动子.该文研究了温度、pH、葡萄糖、乳酸、乙酸、cAMP和IPTG等对CTG表达的影响.CTB表
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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在工程菌MM2,即E.coli TK1046(pMM-CTB)中,CTB基因的上游有两个启动子:lac启动子和ctb启动子.该文研究了温度、pH、葡萄糖、乳酸、乙酸、cAMP和IPTG等对CTG表达的影响.CTB表达受温度和pH的调节,在30℃和pH7.2时低表达,在37℃和pH8.4时高表达.在LB培养基中加入乳酸和乙酸可提高CTB表达水平.通过正交实验,以乳酸为碳源获得高表达培养基.有葡萄糖代替乳酸会大幅度降低CTB的表达,其原因和培养过程中pH值降低有关.cAMP和IPTG对CTB表达没有促进作用,因此CTB的表达与lac启动子无关,主要由ctb启动子控制.在5L发酵罐中培养,采取两阶段培养温度控制、中间补加乙酸钠和控制后期pH值等措施,菌密度平均达OD<,600>30.27,CTB产量平均达186.7mg/L.表达产物CTB在培养液中以多聚体形式存在,具有抗原性.
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