基于HPLC-Triple TOF/MS技术分析两地人参活性成分

来源 :吉林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang506079845
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研究目的:人参作为一种具有抗癌、缓解疲劳以及抗炎等作用的保健食品深受国内外人民的欢迎,而人参皂苷作为人参中重要的活性成分直接决定了人参的功效和价格。由于产地的土壤状态、温度、湿度以及海拔条件等不同,使人参中人参皂苷的种类和含量上存在差异,导致其功效也不相同。目前对人参产地的鉴别主要是依靠形态学鉴定,依赖于专业技术人员的经验,容易出现误判,缺少客观数据的支撑。因此开展对不同产地人参的化学成分研究,建立数据谱库,对于人参的质量控制、产地鉴别、品质评价是十分必要的。本论文主要围绕人参的主要活性成分--人参皂苷进行研究分析,深入探讨两产地人参中主要的差异标志物,并建立产地溯源数据谱库和人参皂苷定量分析方法。研究方法:1.建立人参中化学成分检测方法。建立高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱检测分析方法(High Performance Liquid Chromatography Triple Time of Flight Mass Spectrometry,HPLC-Triple TOF/MS);优化液相色谱条件(色谱柱和流动相种类及梯度洗脱程序的选择)和样品前处理条件(超声时间、提取溶剂等);应用优化后的条件采集两个产地人参中人参皂苷的质谱信息,供后续分析使用。2.鉴定人参皂苷成分,构建质谱数据库。基于建立的HPLC-Triple TOF/MS方法提取得到的人参中人参皂苷的质谱信息,通过SCIEX天然产物高分辨二级数据库和人参皂苷标准品对人参皂苷进行确证。人参皂苷标准品通过质谱仪器扫描采集质谱信息,结合SCIEX OS软件建立人参皂苷的保留时间、精确质量数据库和质谱图库。将建立的谱库信息与人参样品中采集得到的信息进行匹配,比较精确质量数偏差、保留时间以及母离子碎片和子离子碎片信息,对人参皂苷进行定性。无标准品的人参皂苷则通过SCIEX天然产物高分辨二级数据库的精确质量数比对和数据匹配进行确证。3.筛选差异标志物,建立产地鉴别数据谱库。将得到的人参皂苷数据结合Metabo Analyst在线数据分析平台进行主成分分析(Principle Component Analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(Orthogonal Partial Least Squares Discrimination Analysis,OPLS-DA),根据分离程度以及VIP值和P值判断两地人参之间的差异标志物,建立产地鉴别的数据谱库。4.定量检测目标人参皂苷。通过配制的人参标准品工作液,绘制20种人参皂苷的标准曲线,并应用建立的HPLC-Triple TOF/MS方法对两地人参中人参皂苷的含量进行测定,并对含量进行统计学分析。研究结果:1.经方法优化,最终确定检测条件为:人参样品经70%甲醇提取15 min,使用0.1%的甲酸水-乙腈作为流动相,在C18色谱柱上梯度洗脱90 min,通过HPLC-Triple TOF/MS法进行检测。2.基于建立的HPLC-Triple TOF/MS法对人参中人参皂苷成分进行测定,根据所得质谱信息结合SCIEX天然产物高分辨二级数据库和人参皂苷标准品比对后,共鉴定出24种人参皂苷。3.得到的人参皂苷数据结合Metabo Analyst在线数据分析平台进行主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析,根据分离程度以及VIP值和P值最终鉴定出两产地人参中共存在13种差异标志物,同时建立了产地鉴别的数据谱库。4.使用建立的20种人参皂苷的标准曲线对鉴定出的人参皂苷进行精准定量,比较两产地人参中人参皂苷含量的差异。随后应用定量结果对两地人参中20种人参皂苷的含量进行统计学分析得到:人参皂苷Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、20(S)-Rg3、Rk1、F4、F1、Pseudoginsenoside RT5、Notoginsenoside R1、F3、protopanaxatriol在两地人参中的含量存在显著性差异(P<0.05),而人参皂苷Rg1、Rf、Rd、Rs2和20(S)-ginsenoside Rg2、20(S)-ginsenoside Rh2、Notoginsenoside R2在含量上没有统计学差异。结论:1.本论文采用HPLC-Triple TOF/MS检测技术结合多元统计分析手段建立了两产地人参中人参皂苷的定性方法,在两地人参中共鉴定出24种人参皂苷。2.将HPLC-Triple TOF/MS方法得出的数据结合多元统计分析手段进行统计学分析处理,成功构建了两地人参中人参皂苷种类和含量差别的数据库,并鉴定出了13个差异标志物。3.建立了两地人参中20种人参皂苷的定量分析方法。通过标准曲线定量检测两地人参中20种人参皂苷的含量,得到人参皂苷Rb2、Rb3、Rb1、Rc、Ro、F3、Re和Notoginsenoside R1的含量俄罗斯人参高于中国人参;人参皂苷20(S)-Rg3、Rk1、F4、F1以及protopanaxatriol(原人参三醇)和Pseudoginsenoside RT5的含量中国人参高于俄罗斯人参。研究结果为人参中人参皂苷分析的科学性、客观性评价提供了参考,也为打击掺假售假行为提供了数据支撑。
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