黄油中异油酸和CLA的检测与富集方法研究

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许多研究者在寻找一些可能性来增加乳脂的价值时都强调一些天然存在于乳脂中的脂肪酸对健康的益处。其中包括,共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)已经显示出具有的健康好处,例如减少的癌症的发病率和动脉粥样硬化,以及控制体重和有助于骨头的形成。另一种与健康促进和疾病预防相关的重要脂肪酸是异油酸(vaccenic acid,t11-C18:1),其为共轭亚油酸的代谢前体。虽然在天然乳脂中发现的这些反式脂肪酸与健康益处积极相关,但在人造黄油氢化生产过程中形成的反式脂肪酸已被证明有负面影响,增加心脏疾病的风险。基于这种认识,本文试图建立方法,达到分析和富集异油酸和CLA的目的,为进一步进行功能研究提供基础和思路。为分析测定牛奶和黄油中异油酸的含量,建立了毛细管电泳分析异油酸的方法。优化后的电泳条件为:缓冲液含4%(w/v)β-CD、54mmol·L-1SDS、80mmol·L-1硼酸盐(pH9.0)、8mol·L-1尿素和4%(v/v)甲醇,电泳电压为25kV、毛细管柱温为15℃。该方法测定异油酸在100~2500μg·mL-1范围内的线性关系良好(R2=0.9817),检出限(LOD)为10μg·mL-1,平均加标回收率为95.6%。通过该方法测得市售牛奶中异油酸的含量为11.25mg·g-1乳脂,c9,t11-CLA含量为9.86mg·g-1乳脂。黄油中异油酸的含量为7.54mg·g-1脂肪,c9,t11-CLA的含量为9.92mg·g-1乳脂。该方法不仅可以准确测定牛奶和黄油中的异油酸,而且可以同时检测牛奶和黄油中的主要共轭亚油酸异构体。制备高纯度共轭亚油酸和异油酸是研究和开发的前提。通过水解黄油得到游离脂肪酸,然后通过尿素包合结晶分离出不同的脂肪酸成分。研究了尿素包合过程中回流时间、包合时间、包合温度、尿素与溶剂配比等主要条件与纯化得到的CLA和异油酸纯度和得率的关系。结果表明,尿素与溶剂配比是影响两者纯度和得率的主要因素。当混合脂肪酸:尿素:乙醇为1:3:9(W/W/V),在室温下富集CLA和异油酸,得到CLA的纯度为10.12%,得率为75.03%,异油酸的纯度为3.02%,得率为36.11%。
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