荔枝种质资源离体保存的研究

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荔枝(litchi chinesis Sonn.)属无患子科(Sapindaceae)荔枝属(Litchi),是我国著名的亚热带常绿果树。中国是荔枝的主要发源地,在长期的自然进化与栽培过程中,形成了很多具有重要或潜在价值的荔枝品种。保存这些荔枝品种对世界荔枝业的可持续发展具有重要的战略意义。可是,传统的田间种植保存,易受病虫害、自然灾害及经费短缺等弊端的困扰,使得大量的荔枝资源面临流失的危险。离体保存是一种经济、安全实用的方法,正在成为田间种植保存的重要补充技术。鉴于此,我进行了荔枝种质资源离体保存的方法研究。主要结果如下: (1) 建立了荔枝胚性愈伤组织的培养体系 通过对3个品种的花药、13个品种的幼胚及其它外植体的诱导,最终得到元红、陈紫的花药的胚性愈伤组织,早红、绿纱、马公嚎、兰竹、乌叶、竹口乌叶、下番枝等品种幼胚诱导出的胚性愈伤组织,由下番枝、元红的茎段、叶柄和幼叶诱导出的非胚性愈伤组织。筛选出比较适合诱导荔枝胚性愈伤组织的培养基组合:MS+2,4-D2.0mg·L-1+BA1.0mg·L-1(NAA0.5mg·L-1)+LH400mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂6g·L-1。 (2) 建立了荔枝实生苗的茎尖启动体系 通过对下番枝和元红实生苗的茎尖培养,筛选出诱导芽的最适合的培养基即1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂6g·L-1,并得到了最佳防褐化剂即AC2.0g·L-1,但没有得到合适的增殖培养基。 (3) 改进和完善了荔枝胚性愈伤组织缓慢生长保存法 利用改变基本培养基为3/4MS、加大琼脂含量为8g·L-1、添加甘露醇20g·L-1、添加PP33320mg·L-1、保存温度至15℃或者在15℃下添加琼脂8g·L-1、添加甘露醇20g·L-1、添加PP33320mg·L-1等方法(以上方法其它成分同常规保存的固体培养基)对荔枝愈伤组织进行了缓慢生长法保存,最长的继代时间可以延至100d。 (4) 对保存中的愈伤组织进行了生理变化方面的测定 实验证明,不同方法保存的愈伤组织中的SOD的变化大致是先升后降的,
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