鹿角冒中有效物质的提取、分离及性能研究

被引量 : 0次 | 上传用户:bood
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目前,我国是世界上的鹿产业大国,而吉林省的特色产业之一就是养鹿业。鹿角冒(Antler base)是梅花鹿或马鹿鹿茸根部骨质部分,鹿茸被锯掉后,于第二年的春天新鹿茸长出后脱落。它长得像一个圆盘,故命名为鹿角盘或鹿角冒。鹿角冒在2000年前就被记载在中国药典《神农本草经》上,认为其具有强筋健体、补肾、行血消肿和滋阴的功效。在中国,鹿角冒被广泛地用于中药中,用于治疗一系列的疾病,如乳腺炎、乳腺增生、恶性溃疡、儿童流行性腮腺炎及子宫肿瘤等。多年以来,很多研究人员主要集中在鹿茸的药理价值上。相对于鹿角冒蛋白的研究较少,范围较窄,严重阻碍了鹿角冒产业的发展。因此,本文以鹿角冒为原料,更广泛、更深入的研究鹿角冒蛋白,以促进鹿角冒产业的开发,带来更高的经济和药用价值。本文通过三条途径分别考察了鹿角冒中肽聚糖识别蛋白的提取、分离及性能检测;抗氧化活性多肽的制备及精制;胶原蛋白的提取及性能检测等。主要研究内容分为以下五个部分:(1)鹿角冒识别蛋白1(cnPGRP1)是从梅花鹿鹿角冒中提取分离出的一种新的抗微生物蛋白,它在切掉鹿茸的创面上高度表达。文中采用预冷的5mM的乙酸钠缓冲溶液进行匀浆提取鹿角冒可溶性蛋白,可溶性蛋白经两倍体积的乙醇沉淀除杂,40℃旋转蒸发除乙醇后,冻干得鹿角冒粗多肽。并采用凝胶葡聚糖G-25、CM阳离子吸附树脂及高效液相色谱柱对粗多肽进行分离纯化。纯化后的多肽经SDS-PAGE电泳分析,其分子量为17.2kDa。鹿角冒多肽经MALDI-TOF-MS鉴定为肽聚糖识别蛋白1,匹配序列为RLYEIIQKWPHYRA。我们定义该纯化蛋白为cnPGRP1。在本文的体外抑菌试验中,我们提取分离纯化的cnPGRP1,在浓度为50-250μg/mL,作用4h时,均能在不同程度上杀死革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。通过微生物绑定试验表明,鹿角冒肽聚糖识别蛋白能够绑定到革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌和枯草杆菌)、革兰氏阴性菌(大肠杆菌和志贺氏菌)以及真菌(酵母菌)。cnPGRP1是直接从组织中提取、分离纯化得到的单体,与通过克隆、分离纯化的小鼠及人类的PGRP1不同,其杀菌活性不依赖于Zn2+等阳离子,类似于牛科的PGRP1。(2)采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰蛋白酶五种酶酶解鹿角冒蛋白,制备抗氧化活性多肽。文中探讨了各种酶的水解能力,及产物的抗氧化活性,其中碱性蛋白酶的水解能力和酶解后产物的抗氧化活性均较高,最终选择碱性蛋白酶作为最佳用酶。根据单因素试验结果,对影响鹿角冒蛋白水解工艺的酶浓度(X1)、温度(X2)和pH值(X3)三个因素进行优化,并以酶解液对DPPH自由基的清除率为响应值(Y),进行三因素五水平的响应面分析,得出显著性水平α﹤0.05下的数学模型:Y=73.45+3.49X1-1.18X2-1.21X1X2-2.47X1X3-3.89X21-4.03X22-2.57X23。在模型的基础上,计算得出最佳酶解工艺参数:底物浓度15%、加酶量6%、温度53℃、pH8.5的参数条件下酶解4h,在此条件下,酶解液清除DPPH·自由基的能力为74%(5mg/ml)。(3)抗氧化活性多肽的精制主要体现在脱色和脱盐两个方面。通过研究各脱色因素(多肽的pH、脱色温度、脱色时间、活性炭用量)对活性碳脱色效果的影响,确定了活性碳的脱色最佳条件为活性碳用量2%,pH5,脱色温度50℃时,脱色3h,在此最优条件下,活性炭对鹿角冒多肽的脱色率达到79.86±0.26%。通过研究各吸附因素(pH、温度、浓度、料液比)对DA201-C大孔树脂吸附能力的影响,确定了树脂的静态吸附的最优条件:取pH4.0,温度25℃,多肽浓度10mg/mL,料液比1:5,振荡吸附24h,在此条件下,树脂对鹿角冒多肽的吸附率达到78.52±1.05%。根据DA201-C树脂的动态吸附与解析试验对多肽进行脱盐处理,多肽的脱盐率达到98.64±2.45%,多肽的回收率为86.31±0.97%。采用抗氧化活性试验检测脱盐后多肽的抗氧化活性,得出多肽经DA201-C树脂除盐后,鹿角冒多肽仍具有较高的抗氧化活性。所以,采用DA201-C树脂对鹿角冒多肽的除盐和初步的粗分具有良好的工业前景。(4)通过研究加酶量、电场强度及脉冲数三个因素对提取鹿角冒中胶原蛋白的影响,并以提取胶原蛋白的浓度为试验指标,并联合提取液的电泳条带,确定了胶原蛋白的最佳提取条件为电场强度20kV/cm,脉冲数为8,胃蛋白酶的浓度2%,在此最佳条件下胶原蛋白的提取率为73.41±1.07%,电泳条带较纯,没有小分子多肽条带。对提取的胶原蛋白进行体外成纤维及变性温度检测,得出所提取的胶原蛋白具有很好的体外成纤维能力,其变性温度为36℃。红外检测表明,所提取蛋白具有胶原蛋白的特征。
其他文献
以Jef Verschueren的顺应理论框架为研究范式,对信用证中的模糊语言进行定性分析,通过解析UCP500/UCP600惯例中的典型实例,指出了英语商务信用证中容忍一定的模糊性,例释了模
本文就目前我国旅游业的现状讨论了加入WTO对我国旅游业的影响,并阐述了加入WTO后我国旅游业的改革与发展方向。
目的 评价脑电双频指数(BIS)指导靶控输注丙泊酚复合瑞芬太尼用于全麻脑血管动脉瘤介入术中的价值。方法 将我院脑动脉瘤行介入术患者68例,采用随机分为两组:常规监测下靶控
目的:1.观察儿童咳喘贴治疗小儿哮喘的临床疗效。2.探讨白芥子不同剂量组方的量效关系,进行儿童咳喘贴最佳组方有效性、安全性评价及其稳定性的研究,为其临床应用提供可靠的数
本实验以桑叶为研究对象,采用绿茶加工工艺制备桑茶,特别考虑采用影响绿茶品质最重要的不同的杀青工艺并进行优化处理,制备目标功能成分含量高及滋味品质好的桑茶。同时考虑
目前,德育效果低下是一个不争的事实。当我们从德育主体的视角来重新审视我们的德育实践时,就会发现德育理论与实践的严重脱节,即德育理论上的主体性目标与德育实践中“人的失落
鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)是指原发于鼻咽腔部的恶性肿瘤。EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染与NPC有着密切关系。EBV感染人体后,可通过多种特异性病毒抗原介
非常规货币政策已经成为救助2007~2009年金融危机的重要手段,但学术界对非常规货币政策的研究还相当有限。由于非常规货币政策在此次金融危机中登上了全球范围的舞台,并扮演了
次贷危机的爆发为我国商业银行金融产品创新的风险控制敲响了警钟。金融创新既为提高商业银行竞争力做出了突出贡献,但也提高了商业银行风险防范的难度。在概括金融创新内涵
[目的]探讨品管圈活动提高体外受精(IVF)助孕病人健康教育课堂到课率的影响,从而提高病人健康教育的知晓率,提升护理服务品质。[方法]开展以“提高IVF助孕病人健康教育课堂的