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目前,我国是世界上的鹿产业大国,而吉林省的特色产业之一就是养鹿业。鹿角冒(Antler base)是梅花鹿或马鹿鹿茸根部骨质部分,鹿茸被锯掉后,于第二年的春天新鹿茸长出后脱落。它长得像一个圆盘,故命名为鹿角盘或鹿角冒。鹿角冒在2000年前就被记载在中国药典《神农本草经》上,认为其具有强筋健体、补肾、行血消肿和滋阴的功效。在中国,鹿角冒被广泛地用于中药中,用于治疗一系列的疾病,如乳腺炎、乳腺增生、恶性溃疡、儿童流行性腮腺炎及子宫肿瘤等。多年以来,很多研究人员主要集中在鹿茸的药理价值上。相对于鹿角冒蛋白的研究较少,范围较窄,严重阻碍了鹿角冒产业的发展。因此,本文以鹿角冒为原料,更广泛、更深入的研究鹿角冒蛋白,以促进鹿角冒产业的开发,带来更高的经济和药用价值。本文通过三条途径分别考察了鹿角冒中肽聚糖识别蛋白的提取、分离及性能检测;抗氧化活性多肽的制备及精制;胶原蛋白的提取及性能检测等。主要研究内容分为以下五个部分:(1)鹿角冒识别蛋白1(cnPGRP1)是从梅花鹿鹿角冒中提取分离出的一种新的抗微生物蛋白,它在切掉鹿茸的创面上高度表达。文中采用预冷的5mM的乙酸钠缓冲溶液进行匀浆提取鹿角冒可溶性蛋白,可溶性蛋白经两倍体积的乙醇沉淀除杂,40℃旋转蒸发除乙醇后,冻干得鹿角冒粗多肽。并采用凝胶葡聚糖G-25、CM阳离子吸附树脂及高效液相色谱柱对粗多肽进行分离纯化。纯化后的多肽经SDS-PAGE电泳分析,其分子量为17.2kDa。鹿角冒多肽经MALDI-TOF-MS鉴定为肽聚糖识别蛋白1,匹配序列为RLYEIIQKWPHYRA。我们定义该纯化蛋白为cnPGRP1。在本文的体外抑菌试验中,我们提取分离纯化的cnPGRP1,在浓度为50-250μg/mL,作用4h时,均能在不同程度上杀死革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。通过微生物绑定试验表明,鹿角冒肽聚糖识别蛋白能够绑定到革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌和枯草杆菌)、革兰氏阴性菌(大肠杆菌和志贺氏菌)以及真菌(酵母菌)。cnPGRP1是直接从组织中提取、分离纯化得到的单体,与通过克隆、分离纯化的小鼠及人类的PGRP1不同,其杀菌活性不依赖于Zn2+等阳离子,类似于牛科的PGRP1。(2)采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、菠萝蛋白酶和胰蛋白酶五种酶酶解鹿角冒蛋白,制备抗氧化活性多肽。文中探讨了各种酶的水解能力,及产物的抗氧化活性,其中碱性蛋白酶的水解能力和酶解后产物的抗氧化活性均较高,最终选择碱性蛋白酶作为最佳用酶。根据单因素试验结果,对影响鹿角冒蛋白水解工艺的酶浓度(X1)、温度(X2)和pH值(X3)三个因素进行优化,并以酶解液对DPPH自由基的清除率为响应值(Y),进行三因素五水平的响应面分析,得出显著性水平α﹤0.05下的数学模型:Y=73.45+3.49X1-1.18X2-1.21X1X2-2.47X1X3-3.89X21-4.03X22-2.57X23。在模型的基础上,计算得出最佳酶解工艺参数:底物浓度15%、加酶量6%、温度53℃、pH8.5的参数条件下酶解4h,在此条件下,酶解液清除DPPH·自由基的能力为74%(5mg/ml)。(3)抗氧化活性多肽的精制主要体现在脱色和脱盐两个方面。通过研究各脱色因素(多肽的pH、脱色温度、脱色时间、活性炭用量)对活性碳脱色效果的影响,确定了活性碳的脱色最佳条件为活性碳用量2%,pH5,脱色温度50℃时,脱色3h,在此最优条件下,活性炭对鹿角冒多肽的脱色率达到79.86±0.26%。通过研究各吸附因素(pH、温度、浓度、料液比)对DA201-C大孔树脂吸附能力的影响,确定了树脂的静态吸附的最优条件:取pH4.0,温度25℃,多肽浓度10mg/mL,料液比1:5,振荡吸附24h,在此条件下,树脂对鹿角冒多肽的吸附率达到78.52±1.05%。根据DA201-C树脂的动态吸附与解析试验对多肽进行脱盐处理,多肽的脱盐率达到98.64±2.45%,多肽的回收率为86.31±0.97%。采用抗氧化活性试验检测脱盐后多肽的抗氧化活性,得出多肽经DA201-C树脂除盐后,鹿角冒多肽仍具有较高的抗氧化活性。所以,采用DA201-C树脂对鹿角冒多肽的除盐和初步的粗分具有良好的工业前景。(4)通过研究加酶量、电场强度及脉冲数三个因素对提取鹿角冒中胶原蛋白的影响,并以提取胶原蛋白的浓度为试验指标,并联合提取液的电泳条带,确定了胶原蛋白的最佳提取条件为电场强度20kV/cm,脉冲数为8,胃蛋白酶的浓度2%,在此最佳条件下胶原蛋白的提取率为73.41±1.07%,电泳条带较纯,没有小分子多肽条带。对提取的胶原蛋白进行体外成纤维及变性温度检测,得出所提取的胶原蛋白具有很好的体外成纤维能力,其变性温度为36℃。红外检测表明,所提取蛋白具有胶原蛋白的特征。