论文部分内容阅读
目的:本文拟检测尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)系统对白血病骨髓微环境中的重要组分骨髓基质细胞(BMSCs)的相关作用;通过体外建立白血病细胞系和骨髓基质细胞或人HS-5细胞两组直接接触共培养细胞体系,探讨uPA系统在骨髓基质细胞和白血病细胞共培养体系中的作用;拟通过阿米洛利处理后,观察单独培养的骨髓基质细胞和两组共培养体系中uPA系统中各因子的表达变化。方法:采用实时荧光定量PCR检测单独培养白血病骨髓基质细胞,BMSCs-K562和HS-5-K562两组共培养体系中三种细胞中的uPA,尿激酶纤溶酶原激活物受体(uPAR),尿激酶纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1),基质金属蛋白酶(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA的表达水平,并与阿米洛利作用后的表达水平做对比;采用MTT法测定阿米洛利对骨髓基质细胞的抑制作用;采用ELISA检测了单独培养的白血病骨髓基质细胞,BMSCs-K562和HS-5-K562两组共培养体系培养上清液中uPA、suPAR、PAI-1的含量。结果:(1)与HS-5细胞相比较,T-ALL和M1的白血病骨髓基质细胞中uPA表达增高,T-ALL,B-ALL,M5和M1的PAI-1表达增高,M1的VEGF表达增高,T-ALL,B-ALL和M5的uPAR表达降低,结果均有显著性差异(P<0.05)。(2)在BMSCs-K562共培养体系中,与对照组相比,共培养3天和4天的BMSCs细胞中uPA,uPAR,PAI-1,MMP-9和VEGF和共培养3天和4天的K562细胞中uPA的mRNA表达量均显著升高(P<0.05),并具有时间依赖性;在HS-5-K562共培养体系中,与对照组相比,共培养3天和4天的HS-5细胞中uPA,PAI-1和VEGF的mRNA表达量均显著升高(P<0.05),并具有时间依赖性;两组共培养体系相比较,BMSCs细胞和HS-5细胞中的mRNA的表达量均具有时间依赖的升高趋势,但BMSCs细胞升高的强度显著高于HS-5细胞。(3)阿米洛利对白血病骨髓基质细胞的生长抑制率随着作用时间延长而增强,具有时间和浓度依赖性。阿米洛利作用4小时后,BMSCs细胞uPAR和PAI-1表达量降低;作用13小时后,BMSCs细胞uPA表达量降低,MMP-9表达升高;K562细胞中uPA,uPAR和MMP-9的mRNA表达量均下降;HS-5细胞中PAI-1的mRNA表达量下降(P<0.05)。阿米洛利处理HS-5-K562共培养体系后,结果显示uPA系统的各因子在药物作用后有下降的趋势。其中K562细胞的VEGF mRNA的表达量显著下降(P<0.05)。(4)在单独培养体系中,与HS-5相比,BMSCs上清液中uPA和PAI-1含量较高。在BMSCs-K562和HS-5-K562两组共培养体系中,与对照组BMSCs细胞或者HS-5细胞相比,共培养3天和4天后的上清液中uPA含量均升高。阿米洛利处理白血病骨髓基质细胞8小时和13小时后,上清液PAI-1含量显著降低(P<0.05)。结论:(1)BMSCs-K562共培养体系中,在K562细胞的作用下,BMSCs中uPA,uPAR,PAI-1,MMP-9和VEGF的表达均显著增强;在BMSCs的作用下,K562细胞中只有uPA的表达增强,但不如基质细胞显著。(2)阿米洛利可以显著抑制在白血病骨髓基质细胞中uPA、uPAR和PAI-1的表达,增强MMP-9的表达。阿米洛利抑制了HS-5-K562共培养体系中VEGF mRNA的表达。