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目的检测HAUSP在不同病理级别胶质瘤组织和U87胶质瘤细胞系中的表达,初步研究HAUSP与NANOG及胶质瘤细胞分化状态的关系,HAUSP与NANOG在胶质瘤细胞中的亚细胞定位,探讨HAUSP-NANOG调控网络在胶质瘤生物学行为中的作用。为后续进一步体内外研究HAUSP-NANOG调控网络对胶质瘤细胞生物学活性的影响奠定基础。方法(1)采用免疫组织化学染色法、Western blot和Real time-PCR方法从蛋白和mRNA水平检测70例不同病理级别胶质瘤组织和10例正常脑组织标本中HAUSP的表达。(2)免疫组织化学染色检测HAUSP、CD133在不同级别胶质瘤中的表达,血清剥夺法从U87胶质瘤细胞株分离培养BTSCs,通过全反式维甲酸诱导分化,免疫细胞荧光双重染色观察HAUSP及CD133在不同时期表达情况。(3)采用免疫组织化学染色SP法检测HAUSP、NANOG在不同级别胶质瘤组织中的表达情况;采用双重免疫荧光细胞化学染色法检测在胶质瘤细胞U87中HAUSP/NANOG亚细胞定位。结果(1) HAUSP蛋白在胶质瘤组织WHOⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级和IV级中的差异有统计学意义(F=15.926, P=0.000),HAUSP mRNA的相对含量在胶质瘤组织WHOⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级、IV级中的差异有统计学意义(F=57.892,P=0.000),HAUSP蛋白和mRNA表达水平随着病理级别增高而升高,而在正常脑组织中呈低表达。(2)不同级别胶质瘤中HAUSP+细胞、CDl33+细胞百分比差异均有统计学意义(P<0.05),高级别组胶质瘤中HAUSP+细胞、CDl33+细胞表达高于低级别组,差异有统计学意义(P<0.05);HAUSP+表达和CDl33+表达呈正相关关系(r=0.915,P=0.000);利用无血清悬浮培养法从U87胶质瘤细胞系中成功分离培养出BTSCs,具有自我更新与增殖能力,表达特异性干细胞标记物CD133,在SCM中BTSCs发生贴壁分化,表达神经元和星形胶质细胞的特异性标记物NSE和GFAP。全反式维甲酸诱导分化,HAUSP、CD133随着胶质瘤干细胞分化表达逐渐减少。(3) HAUSP、NANOG在胶质瘤组织中的表达随着病理级别的增高而增多,两者呈正相关性,与胶质瘤级别呈正相关,具有统计学意义(P<0.05);在胶质瘤细胞U87中,两者均有表达,且两者共定位于细胞核。结论(1) HAUSP在胶质瘤组织中高表达,表达水平随着病理级别增高而升高,而在正常脑组织中均呈低表达。(2) U87胶质瘤细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的BTSCs;HAUSP与胶质瘤干细胞的分化状态密切相关,在胶质瘤组织中与CD133表达呈正相关。(3)在胶质瘤组织中HAUSP与NANOG表达呈正相关,并且二者在U87细胞中均有表达,且在细胞核中有共同亚细胞定位。为后续进一步体内外研究HAUSP的表达对胶质瘤细胞生物学活性的影响及对NANOG蛋白的调控机制奠定基础。