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研究背景：慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是获得性造血干细胞恶性克隆性疾病。占成人白血病的15%。发病机制是Ph染色体t(9：22)(q34：q11)的存在,由于Ph染色体易位形成BCR/ABL融合基因,该基因编码的P210蛋白具有酪氨酸激酶活性,造成粒细胞的转化和过度增殖。BCR-ABL基因被认为是CML的发病机制的分子基础以及诊断和预后的有效指标。慢性粒细胞白血病患者应用ABL酪氨酸激酶抑制剂(TKI)疾病很容易得到控制,但是接受这种治疗的患者中大约三分之一的患者会出现疾病进展,这可能与BCR.ABL基因突变及相关耐药性有关。基因和免疫因素被认为在CML的发展中起到重要作用。T细胞免疫缺陷在肿瘤的进展中亦起重要作用,近年来免疫因素在CML中的作用受到越来越多的关注。免疫状态在CML是非常复杂和不明确的,因此了解慢性粒细胞白血病患者的免疫状态,对进一步制定以免疫治疗为基础的、有效的治疗方案具有重要意义。已有研究表明T细胞数量异常,CD4+T细胞与CD8+T细胞两个T细胞亚群水平的上调或下调,与机体的免疫功能紊乱和某些血液系统疾病的发生发展密切相关。然而异常的Th亚群和相关的细胞因子在CML的发生发展中的作用,目前研究报道尚少见。多年来人们对CD4+T辅助(Th)细胞的异质性的研究局限于Thl和Th2细胞。研究显示这两种细胞介导分泌不同的细胞因子,具有不同的免疫功能。Thl细胞介导激活CD8+CTL细胞,产生致炎性细胞因子,保护细胞抵抗胞内微生物,通过分泌IL-2和IFN-γ促进繁殖,从而发挥抗细菌、抗病毒和抗肿瘤的作用。此外,IL-2和IFN-γ可以增加NK细胞的抗肿瘤作用。Thl7细胞和Th22细胞为近年新近发现的两个Th细胞亚群,在外周免疫反应中发挥着重要的作用。Thl 7是一种独特的CD4+Th细胞,其分化与发育依赖于细胞因子的作用,Th17细胞特异性表达趋化因子受体CCR6及其配体CCL20,分泌IL-17A,IL-17F,IL-21和IL-22。它们对于细胞外的病原体,包括细菌和真菌有重要作用,参与炎症和自身免疫疾病的发生。Th17在不同的免疫介导的疾病以及肿瘤的发病机制中发挥重要作用。Th17细胞参与肿瘤免疫,但在不同肿瘤的研究中报道并不一样,是促进还是抑制肿瘤的发生发展目前尚无定论,Th17在肿瘤发生发展中所起的作用仍在研究中。IL-17在自身免疫、肿瘤和机体抗感染免疫中作为Th17细胞的主要效应因子,在多种组织的基质细胞发挥重要作用。在骨髓基质中,IL-17通过调节结合性和可溶性细胞因子的表达,干预造血干细胞和间充质干细胞的增殖、分化和动员。Th22细胞是最近发现的一种新型的CD4+辅助T细胞亚群,其分泌IL-22和TNF-a,而不分泌IL-17和IFN-γ。Th22细胞表达趋化因子受体CCR6及皮肤归巢受体CCR4、CCR10,高度表达芳香烃受体的关键转录因子(AHR)。初始性CD4+T细胞在IL-6和肿瘤坏死因子a(TNF-a)的作用下,可以向Th22的表型方向分化,最终形成Th22细胞群。Th22细胞代表一个独立的终末分化的T细胞亚型。IL-22属于IL-10细胞因子家族,Th22是主要产生IL-22的T细胞亚群,Th22细胞的功能主要通过IL-22来实现。IL-22在差异诱导幼稚和记忆／效应细胞中发挥保护或致病作用。IL-22通过调节上皮细胞的生物学活性,在诱导急性炎性介质反应、抗感染、增强宿主防御复等方面起重要作用。当前研究表明,IL-22参与细胞生长,增殖和细胞周期的调控[23-25],在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。Th22和Th17细胞的发现为疾病的病因和治疗开辟了一个新的研究途径。最近的研究报道了Th17/Th22细胞及其效应细胞因子IL-17/IL22在一些自身免疫性疾病的发病机理和在肝细胞癌、胃癌[27]和肺癌等肿瘤中的作用。国内外对Th22及其相关细胞因子在肿瘤学领域的研究刚刚起步,关于Th22细胞和IL-22在肿瘤免疫中的作用和在肿瘤微环境中的分化、分布,目前的研究数据尚有限。Th22和Th17细胞在血液系统恶性肿瘤和非肿瘤性血液病中的作用有了一些研究报道。到目前为止,尚未有Th22和Th17、Thl细胞亚群与CML相关的研究报道。在本研究中,我们检测了CML患者外周血和骨髓中Th22、Thl7和Thl细胞的比例、Th17和Th22细胞的相关转录因子AHR和RORC的表达水平及Th22、Th17和Thl相关细胞因子IL-22、IL-17、IFN-γ的浓度,研究上述T细胞亚群在CML中的相关性及其与CML临床特征的关系,为进一步研究Th22、Th17和Thl细胞在血液系统肿瘤免疫机制中的作用提供资料。研究方法：1.共63例CML患者纳入研究,其中初诊(ND)31例,TKI(伊马替尼)治疗后缓解的CML慢性期(CML-CP)患者32例；33例正常对照(22外周血和11例骨髓)2.应用流式细胞术检测Th22/Th17/Th1细胞在CML患者骨髓和外周血中的比例。3.应用实时荧光定量PCR技术检测CML患者Th22和Th17相关转录因子AHR和RORC mRNA的表达水平。4.应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测CML患者骨髓和外周血中的细胞因子IL-22、IL-17和IFN-γ的浓度。5.统计学处理：应用SPSS 13.0统计软件进行实验结果分析。研究结果：1.CML初诊患者外周血和骨髓的Th22、Th17和Th1比例明显低于伊马替尼治疗后疾病缓解的CML-CP和正常对照组(P<0.05)。2.Th22和Th17相关转录因子AHR和RORC mRNA的表达水平：初诊的CML患者外周血和骨髓的单个核细胞的AHR基因转录水平与伊马替尼治疗后缓解的CML-CP患者组和正常对照组比较明显降低(P<0.05)。伊马替尼治疗后缓解的CML-CP患者的外周血AHR的水平比正常对照组显著升高(P<0.05)。伊马替尼治疗后缓解的CML-C P患者骨髓中的AHR的表达水平比正常对照组高(P>0.05),但无统计学差异。初诊的CML患者外周血和骨髓的单个核细胞的RORC基因转录水平与伊马替尼治疗后缓解的CML-CP患者组和正常对照组比较均明显降低(P<0.05)。伊马替尼治疗后缓解的CML-CP患者组和正常对照组的外周血和骨髓的单个核细胞的RORC基因转录水平差异无统计学意义(P>0.05)。3.初诊CML和伊马替尼治疗后缓解的CML-CP患者外周血的IL-17浓度高于正常对照组(P<0.05)。CML-CP组外周血的IL-22浓度比正常对照组升高(P<0.05)。骨髓中IL-22和IL-17的浓度在初诊CML、CML-CP和正常对照组无差异。初诊CML骨髓的IFN-γ浓度比正常对照高(P<0.05),而CML外周血中IFN-γ的浓度在初诊CML、CML-CP和正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。4.CML患者外周血和骨髓的Th22和Th17细胞水平之间均呈正相关,而Th1和Th22、Th17细胞之间无相关性。5.TTh22、Th17和Thl细胞的比例与CML患者外周血白细胞计数及BCR-ABL%(IS)均呈负相关。结论：初诊CML患者体内存在Th22、Th17和Th1细胞数量减少,CML患者的免疫功能低下可能和Th22,Th17或Th1细胞数量的减少有关。经伊马替尼治疗的CML患者,疾病缓解后Th22、Th17和Th1细胞数量得到一定程度的恢复。CML患者体内Th22、Th17和Th1细胞比例和CML患者的BCR-ABL%(IS)及外周血白细胞计数之间存在明显的负相关。Th22,Th17和Th1细胞可能是慢性粒细胞白血病的重要的治疗目标,使肿瘤的免疫治疗获得更好的结果。