尿液中巯基尿酸类代谢物的分析研究

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建立了同时测定吸烟者尿液中丙烯醛、巴豆醛、苯、1,3-丁二烯巯基尿酸代谢物的分析方法,并对丙烯醛、巴豆醛的代谢动力学进行了研究。主要内容包括以下三个部分:   (一)采用乙酸乙酯—甲醇—水体系液—液萃取,双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(1%三甲基氯硅烷)(BSTFA(1%TMCS))衍生化,GC-MS/SIM 法同时测定了吸烟者尿样中丙烯醛、巴豆醛、苯的代谢产物:N-乙酰基-S-(3-羟基丙基)半胱氨酸(3-HPMA)、N-乙酰基-S-(3-羟基丙基-1-甲基)-半胱氨酸(3-HMPMA)、苯巯基尿酸(SPMA)。方法的回收率在89.2%~106.9%之间,相对标准偏差为2.6%~13.6%,采用该方法测定了8 名吸烟者尿液中三种代谢物的含量。   (二)采用Isolute ENV+固相萃取柱对样品进行净化,以0.1%甲酸(pH2.5)   和甲醇为流动相,经Agilent C18 液相色谱柱分离后,用多反应监测模式同时对1,3-丁二烯、苯、丙烯醛、巴豆醛的代谢产物:N-乙酰基-S-(3-羟基丙基)半胱氨酸(3-HPMA)、N-乙酰基-S-(3-羟基丙基-1-甲基)-半胱氨酸(3-HMPMA)、苯巯基尿酸(SPMA)、N-乙酰基-S-(3,4-二羟基丁基)-L-半胱氨酸(DHBMA)、(R,S)-N-乙酰基-S-(1-羟基甲基-2-丙烯基)-L-半胱氨酸和(R,S)-N-乙酰基-S-(2-羟基-3-丁烯基)-L-半胱氨酸(MHBMA)进行检测。回收率为97.17% ~112.49%,相对标准偏差为1.02~9.03%。采用该方法对吸烟者和非吸烟者尿样中的五种巯基尿酸类代谢物进行了测定。   (三)吸烟者连续抽吸2 支、4 支卷烟后,采用GC-MS/SIM 法测定尿中3-HPMA、3-HMPMA 含量,用3P97 计算毒代动力学参数。结果显示,3-HPMA、3-HMPMA在体内的毒代动力学行为符合一级吸收一室模型,抽吸2 支卷烟3-HPMA、3-HMPMA 吸收速率常数Ka分别为1.36/h、0.68/h,抽吸4 支卷烟时分别为1.72/h,1.50/h。抽吸2 支卷烟3-HPMA、3-HMPMA 达峰时间(Tpeak)分别为0.84h、0.77h,抽吸4 支卷烟后3-HPMA、3-HMPMA 达峰时间分别为0.80h、0.77h。抽吸2 支卷烟3-HPMA、3-HMPMA 消除速率常数(Ku)分别为0.35/h、0.71/h,抽吸4 支卷烟时分别为0.40/h,0.68/h。累积排泄量Xu 随给药剂量的增加而成比例增加,提示3-HPMA、3-HMPMA 可以作为吸烟者抽吸丙烯醛、巴豆醛的生物标记物。
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