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研究背景戈谢病是一种常染色体隐性遗传引起的溶酶体贮积病。由于葡糖脑苷脂酶GBA基因突变，葡糖脑苷脂酶活性降低或丧失，造成葡糖脑苷脂在单核-巨噬细胞内蓄积，临床上以肝脾大、贫血、血小板减少、骨骼破坏、反复癫痫发作、共济失调和生长发育落后为主。戈谢病预后不良，给病人及其家庭带来巨大痛苦，同时也给社会增加了沉重负担。总结其临床表现和骨髓穿刺结果，对疾病进行早期诊断。为了减少该类遗传病的发生，基因诊断和遗传咨询渐提上日程。目的现总结我院住院2个家系中2名戈谢病患儿的临床表现及骨髓穿刺结果，通过基因测序研究分析其基因突变类型，为这2个家系提供产前诊断及遗传咨询。方法征得戈谢病患者家属知情同意后，收集了2个无关的戈谢病家系的外周血标本和临床资料，同时为了排除基因多态性，对10名无血缘关系的健康儿童的GBA基因进行测序。使用1ml血液基因组DNA提取试剂盒提取2名患者及其家属的外周血基因组DNA。通过查阅人类基因组Genbank，可以获取GBA基因序列，在GBA基因内含子区域设计引物，在体外环境下，利用聚合酶链反应（PCR）技术对外显子进行扩增，然后对PCR产物进行回收、纯化，采用DNA直接测序的方法对GBA基因进行测序，最后将GBA基因测序结果与人类基因库中的GBA基因序列进行对比分析，了解患儿的基因突变位点及其类型，采用TA克隆技术对发现的突变进一步验证。结果1．家系1和10名正常儿童PCR扩增所得片段与预计扩增片段大小一致，可以进行纯化和测序；2．家系2先证者第9外显子PCR扩增所得片段比预计扩增片段小，其他PCR扩增片段和其父母的所有PCR扩增片段与预计扩增片段大小一致，可以进行纯化和测序；3．家系1中先证者GBA基因第6外显子发生4种突变，N188S（c.680A＞G）杂合突变，N188K（c.681T＞G）杂合突变，V191G（c.689T＞G）杂合突变，S196P（c.703T＞C）杂合突变，先证者父母、姐姐和10名健康儿童第6外显子上述4种突变也以杂合形式存在；4．家系2中先证者及其父母GBA基因第6外显子也发生上述4种突变，同时先证者第9外显子发现缺失突变c.12631317del55和D409H（c.1342G＞C）纯合突变，而先证者父母第9外显子未发现异常。结论1．2个家系中的先证者临床表现及骨髓穿刺结果符合戈谢病的诊断标准，诊断明确；2．家系1和家系2中发现的4种突变N188S（c.680A＞G），N188K（c.681T＞G），V191G（c.689T＞G），S196P（c.703T＞C），考虑为GBA基因与GBA假基因所致，若要进行进一步鉴别，需进一步对GBA基因第6外显子重新设计引物并对家系1和家系2第6外显子进行测序；3．家系2中发现c.12631317del55和D409H（c.1342G＞C）纯合突变为先证者的分子遗传学基础，患儿父母未发现基因突变，考虑患儿这些突变不是来源于其父母，是患儿自身突变所致；4．本研究从分子水平揭示了部分戈谢病的分子遗传学基础，丰富了国内在戈谢病分子遗传学领域的研究，在方法学上为该病的分子遗传学研究提供了可行途径。