蛹虫草类胡萝卜素对小鼠生长、免疫和抗氧化性能的影响

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本文优化了蛹虫草类胡萝卜素的提取方法,利用动物试验和细胞培养试验研究了蛹虫草类胡萝卜素提取物(CMCE)对小鼠生长、免疫、抗氧化性能的影响以及对癌细胞增殖的抑制作用,研究包含三个部分,共四个试验,试验过程和结果分别摘要如下:第一部分试验以蛹虫草类胡萝卜素的提取得率为考察指标,分别运用酸热提取法、超声提取法、酸热超声提取法、微波提取法、酸热微波提取法、丙酮提取法提取类胡萝卜素,比较这6种方法的提取得率,得出酸热超声提取法是较好的提取方法。采用酸热超声提取法,设盐酸浓度、酸浸时间、沸水浴时间、超声功率、超声温度和超声时间等6个单因素试验,结合L27(3B)正交试验设计,优化提取工艺参数。结果表明:1)得出酸热超声提取法的较优提取条件为盐酸浓度2.25 mol/L,酸浸时间30 min,沸水浴时间6 min,超声功率400 W,超声温度25℃,超声时间25 min; 2)蛹虫草类胡萝卜素提取得率为1105.53 lμg/g,比优化前提高12.12%; 3)影响提取得率大小的因素依次为超声功率、酸浸时间、盐酸浓度、沸水浴时间、超声温度、超声时间。第二部分采用体内试验方法分别探讨了以不同浓度CMCE以及不同种类的类胡萝卜素灌喂小鼠后对其生长、免疫和抗氧化性能的影响,包括两个试验,如下:试验一探究了不同浓度的CMCE对小鼠生长、免疫以及抗氧化性能的影响。将120只ICR小鼠随机分为4组,分别灌喂Omg/mL(对照组)、2mg/mL(低浓度组)、4mg/mL(中浓度组)和8mg/mL(高浓度)的CMCE溶液0.2mL/只/天。结果表明:1)与对照组相比,在正试期14d时,低浓度和中浓度组ADG极显著提高(P<0.01),低浓度组F/G显著降低(P<0.∞);而从整个试验期来看,中、低浓度组的ADFI显著高于对照组(P<0.05), ADG极显著高于对照组(P<0.01),F/G极显著低于对照组(P<0.01):灌喂低浓度和中浓度CMCE能提高小鼠DM消化率(P>0.∞)以及血清CHO (P>0.05)和TG含量(P<0.∞),能提高小鼠十二指肠的绒毛高度/隐窝深度(V/C)比值;2)低浓度组和中浓度组小鼠脾脏TNF-amRNA的相对表达量极显著高于对照组(P<0.01);而灌喂高浓度的CMCE能提高小鼠血清IgG的含量(P<0.001)以及小鼠脾脏IL-2 mRNA的相对表达量(P<0.01),能降低小肠三个区段的VC比值;3)低浓度组小鼠血清CAT和GSH-Px活性极显著高于对照组和另外两个处理组(P<0.01);中浓度组小鼠血清MDA的含量显著高于高浓度组(P<0.05);低浓度组小鼠肝脏SOD活性显著高于对照组(P<0.05);肝脏CAT活性随灌喂CMCE浓度的升高而增强,并且高浓度组小鼠肝脏CAT活性显著高于对照组(P<0.05);试验二探究了三种不同的类胡萝卜素对小鼠生长、免疫和抗氧化性能的影响。48只ICR小鼠随机分为4组,分别灌喂大豆油溶液(A组,对照组)、β-胡萝卜素溶液(B组)、叶黄素溶液(C组)和CMCE溶液(D组)0.2mL/只/天。结果表明:1)就整个试验期来看,D组小鼠ADFI显著高于对照组(P<0.05), ADG和F/G各组之间无显著差异(P>0.05);D组小鼠血清GLU和CHO的含量分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)高于对照组,B和C组小鼠血清TG含量分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)高于D组;2)B组小鼠血清IgG含量显著高于D组(P<0.05);D组小鼠血液WBC, Lymph极显著高于对照组(P<0.01), Mon和Mon%显著高于对照组(P<0.05);B组小鼠脾脏IL-2 mRNA的相对表达量显著高于对照组(P<0.05),D组小鼠脾脏IL-4和TNF-a mRNA的相对表达量显著高于对照组和C组(P<0.05);3)B组小鼠血清SOD活性显著高于C和D组(P<0.05),血清CAT和GSH-Px活性分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)高于D组;C组小鼠血清GSH-Px活性极显著高于其他三组(P<0.01);C,D组小鼠血清MDA含量极显著低于B组和对照组(P<0.01);相比于血清抗氧化指标,肝脏中SOD、CAT以及GPX1基因mRNA的相对表达量,各组之间无显著差异(P>0.05)。第三部分试验采用体外细胞培养的方法来探究经初步纯化后的CMCE对两种肿瘤细胞(胃癌细胞MGC80-3和肝癌细胞HepG2)增殖的抑制作用。经过硅胶柱层析初步纯化后,CMCE中类胡萝卜素的含量提高了12倍,再用细胞培养液将其配制成不同的浓度,分别为:60,80,100,120和140μg/mL。同时以顺铂作为阳性对照,以不含药物的细胞培养液为阴性对照开展试验。结果表明:1)作用24h后,CMCE对MGC80-3细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性上升;48h和72h后,80和100μg/mL的CMCE对MGC80-3细胞增殖的抑制作用较强。2)对HepG2来说,与药物共培养24h后,较高浓度的CMCE对HepG2细胞增殖的抑制作用较好;48h后,CMCE对HepG2细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性上升;72h后,120μg/mL的CMCE对HepG2细胞有较强的生长抑制作用。
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