基于组学方法及Lc-MS技术的两种蒙药(森登-4和丹参)作用机制研究

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本研究结合基于组学方法及LC-MS技术分别研究了蒙药森登-4治疗类风湿关节炎的作用机制以及蒙药丹参中的丹参多酚酸盐治疗扩张性心肌病的作用机制。  首先,探究蒙药复方森登-4的配伍机制。蒙药文冠木与栀子、川楝子、诃子以5∶3∶1∶1的比例配伍后得到蒙药复方森登-4;配伍前后的样品采用WatersAcquity BEH-C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm)为色谱柱,0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,体积流量0.4 mL/min,迸样量10μL;并将UPLC-MS技术与主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)相结合,对蒙药复方森登-4配伍前后组方中君药文冠木主要化学成分变化情况进行了分析。在PCA与OPLS-DA模型中,文冠木与复方森登-4均可明显得到区分;配伍后8个化合物在两组间存在显著差异(P<0.05),其中儿茶素、没食子儿茶素、双氢杨梅素、槲皮素的溶出量在配伍后下降,而xanthocerasic acid、3β-hydroxytirucalla-7,24-dien-21-oic acid、3-oxotirucalla-7,24-dien-21-oicacid、芦丁的溶出量升高。蒙药复方森登-4的抗炎及抗风湿活性可能与其中的君药文冠木配伍之后某些指标成分的溶出量变化有一定关系。  其次,以传统蒙药方森登-4治疗佐剂诱导的类风湿关节炎。将UPLC-MS技术与主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)相结合用来区分正常组、模型组、森登-4治疗组的代谢轮廓,并寻找潜在的生物标记物。在PCA与OPLS-DA模型中,三组大鼠的代谢轮廓可以明显区分。利用OPLS-DA方法找到了13个潜在的生物标记物,它们分别是二十二酰胺,溶血磷脂酰乙醇胺,鸟苷磷酸腺苷,依那普利拉,强啡肽B(6-9),磷酯酰丝氨酸,5-鸟苷(二磷酸),二十二碳六烯酸,α-生育三烯酚,维生素D3-23羧酸,三磷酸尿苷,R)-3-羟基-棕榈酸,二十七酸。蒙药方森登-4可能通过影响这些生物标记物的代谢通路从而达到抑制类风湿大鼠组织病理学改变的目的。  最后,将代谢组学与分子生物学方法相结合,研究丹参多酚酸盐治疗扩张性心肌病的作用机制。采用主成分分析(PCA)法,分析了健康组、模型组、丹参多酚酸盐给药组的大鼠血清代谢轮廓,采用正交校正的偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)法寻找潜在的生物标记物,经鉴定,共得到磷酯酰丝氨酸(16∶0/18∶1(9Z))、溶血磷脂(16∶0)、溶血磷脂(20∶4(5Z,8Z,11Z,14Z))、溶血磷脂(22∶6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z))、胆固醇硫酸酯、胆汁酸、γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸、9-羧基-γ-生育酚9种潜在的生物标记物。其中,γ-亚麻酸、二十二碳五烯酸、9-羧基-γ-生育酚的含量在模型组中下降,经丹参多酚酸盐治疗后含量上升。通过Western bloting法与酶联免疫吸附法证实丹参多酚酸盐通过影响体内与γ-亚麻酸、9-羧基-γ-生育酚相关的超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及其下游Bcl-2、Bax蛋白分子表达量,从而减少氧化应激所致的心肌细胞凋亡数量,达到治疗阿霉素所致扩张型心肌病的目的。
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