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【目的】探讨3T3-L1脂肪细胞生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)对游离脂肪酸(free fat acid,FFA)诱导脂肪细胞炎症因子表达和分泌的影响及其作用机制。【方法】(1)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,待分化呈90%成熟脂肪细胞表型,采用siLentFect脂质转染试剂介导siRNA沉默脂肪细胞GHR的表达。细胞转染24h后,Western blot检测si RNA-GHR的沉默效率。(2)分别用0mM、0.05mM、0.1mM、0.5mM、1mM FFA处理3T3-L1脂肪细胞30min、60min、120min、240min,MTT试剂盒检测各组细胞活力变化,分析计算FFA最佳处理时间和浓度。(3)荧光实时定量PCR技术检测沉默GHR表达对FFA诱导的3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1α(monocyte chemoattractant protein-1α,MCP-1α)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)mRNA表达水平;ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌水平。(4)采用双荧光素酶报告基因系统分析沉默GHR表达对FFA诱导3T3-L1脂肪细胞NF-κB转录活性的影响。(5)Western blot检测沉默GHR表达对FFA诱导3T3-L1脂肪细胞NF-κB炎症信号通路分子表达的影响。(6)通过特异性激动剂Forskolin(FK)或抑制剂Okadaic Acid(OA)分别增强或抑制蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的活性,采用双荧光素酶报告基因系统分析NF-κB的转录活性、Western blot检测NF-κB炎症信号通路分子的表达水平,观察沉默GHR表达对FFA激活3T3-L1脂肪细胞NF-κB炎症信号通路的影响。【结果】(1)特异性siRNA-GHR转染3T3-L1脂肪细胞后,siRNA-GHR组GHR的表达水平较siRNA-control组下降85.1%(P<0.05,差异具有显著性)。(2)0.05mM和0.1mM FFA分别处理细胞30min、60min、120min、240min及0.5mM FFA处理细胞30min、60min、120min后,细胞活力较对照组均无明显变化(P>0.05,差异无显著性);0.5mM FFA处理细胞240min及1.0mM FFA处理细胞30min、60min、120min、240min后,细胞活力较对照组明显下降(P<0.05,差异具有显著性)。(3)3T3-L1脂肪细胞经0.5mM FFA处理30 min、60 min、120 min后,TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1α、MIP-1α基因mRNA的表达水平较对照组显著升高(P<0.05,差异具有显著性)。沉默3T3-L1脂肪细胞GHR的表达后,FFA诱导细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1α、MIP-1α基因mRNA的表达水平较对照组显著降低(P<0.05,差异具有显著性)。(4)0.5mM FFA处理细胞30min、60min、120min后,细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平较对照组显著升高(P<0.05,差异具有显著性);沉默3T3-L1脂肪细胞GHR的表达后,细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6的水平较对照组显著降低(P<0.05,差异具有显著性)。(5)FFA诱导细胞NF-κB转录活性增强。随着FFA处理浓度的增加,NF-κB的转录活性逐渐增强(P<0.05,差异具有显著性);而沉默GHR的表达能够显著降低FFA诱导的3T3-L1脂肪细胞NF-κB转录激活(P<0.05,差异具有显著性)。(6)3T3-L1脂肪细胞经0.5mM FFA处理120min后,炎性激酶IKKβ和NF-κB磷酸化水平明显增加;而沉默脂肪细胞GHR的表达可显著降低磷酸化IKKβ和NF-κB p65的过度表达(P<0.05,差异具有显著性)。(7)0.5mM FFA分别处理细胞30min、60min、120min后,PP2Ac蛋白表达水平均无明显变化,但PP2Ac活性受到明显抑制(P<0.05,差异具有显著性);而沉默GHR表达能够显著改善FFA对细胞PP2A活性的抑制作用(P<0.05,差异具有显著性)。(8)沉默GHR表达能够抑制FFA诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症信号通路相关蛋白的活化。且PP2A激活剂FK能够进一步增强此效应,但PP2A抑制剂OA能够部分逆转此效应。【结论】沉默GHR表达通过PP2A/IKKβ/NF-κB信号通路拮抗FFA诱导3T3-L1脂肪细胞炎症因子的表达和分泌。