诱导凋亡是化疗药物治疗肿瘤的重要机制之一。化疗药物如何启动肿 瘤细胞的凋亡以及死亡信号转导的关键环节有哪些是目前国际上化学药物 抗肿瘤治疗的研究热点。阐明这一过程对于临床上提高化疗药物的治疗效 果、了解肿瘤耐药的原因、控制肿瘤的发生以及新药研制具有重大的意义。 5－氟尿喀啶(5－FU)作为抗肿瘤药物在临床上已应用40余年，目前仍是消 化道恶性肿瘤化学治疗的首选药物。但 5-FU诱导细胞凋亡的机制尚未明 确，困此深入研究5－FU诱导凋亡的分子机制将为克服肿瘤细胞的耐药，提 高化疗药物的选择性，开拓出新的思路。 本实验利用透射电镜、流式细胞仪等技术，观察了在不同时间、不同 药物浓度等条件下人胃癌细胞系(AGS)凋亡的发生情况，初步建立了化 疗药物诱导凋亡的实验体系。利用RT－PCR、Northern blot等方法，观察了 在5-FU作用下Cyt-c、Apaf-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2等细胞色素C信号 转导途径中相关分子的表达情况。为了进一步验证细胞色素C信号转导途 径中Apaf-1分子在凋亡过程中的关键作用，桐究利用基因重组、细胞转 染技术建立了正义及反义Apaf-1表达载体，并获得了过度表达Apaf-1的 AGS细胞株。研究发现0.5mM浓度5－FU作用 24小时AGS细胞出现明显 的凋亡现象。细胞色素C信号转导途径中相关分子的表达有显著的时相性。 在 5-FU诱导30分钟后Cyt-c的表达即开始显著上升，Apaf-1的表达则略 晚于Cyt-c。Bax、Caspase-3的表达增高出现在5-FU诱导12小时以后。利 用正义及反义Apaf-1表达载体，发现过度表达Apaf-1可以增加AGS细胞 株对5-FU的敏感性，而反义Apaf-1则可以明显抑制5-FU诱导的凋亡过程。 本研究初步建立了化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的实验体系，观察了 5-FU诱导AGS细胞凋亡过程中细胞色素C信号转导途径相关因子的表达 变化。结果表明细胞色素C信号转导途径可能是5-FU诱导AGS细胞凋亡 的关键通路，而 Cyt-c、Apaf-1的早期表达可能是凋亡瀑布启动的关键因子。