口虾蛄高血糖激素基因全长cDNA序列的克隆及表达分析

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:zhanfeifan
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高血糖激素(crustacean hyperglycemic homone,CHH)对甲壳动物的生长发育生殖等生理生化过程具有重要作用,参与调控甲壳动物血糖调节、生长蜕皮和性腺发育等多种重要的生理活动,能够显著提高血淋巴中的葡萄糖的浓度,调节甲壳动物的糖类代谢,在发育阶段表现的尤为明显。甲壳动物眼柄组织中高血糖激素含量最为丰富且被研究最多,也一直是国内外研究的热点。口虾蛄(Oratosquilla oratoria)是我国沿海重要的多年生的海产经济甲壳类之一,具有极高的经济价值的优良野生品种。近年来,人们对口虾蛄的开发力度不断增大,加之过度捕捞,其野生资源已出现衰竭的倾向,因此资源保护与增值是目前亟待解决的问题。关于国外虾蛄的研究报导越来越多,但主要集中在遗传多样性、形态发育、生态学、组织学、养殖、繁育等方面,而口虾蛄的功能基因及表达分析方面的研究报道仅此一篇。搜索CHH神经肽,发现CHH在甲壳动物中的进化关系至今尚不清楚,CHH在甲壳纲十足目类群已经开展了大量的研究工作,而口足目的尚未有相关的研究报道。因此,有必要对口足目以外的虾蟹CHH基因特性进行研究,为探甲壳动物生长、繁殖相关基因的功能演化及进化关系提供重要依据。本文以口虾蛄为实验材料,采用cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆CHH基因全长cDNA序列,并对口虾蛄不同组织做实时荧光定量分析,旨在为口虾蛄蜕皮等相关功能研究和作用机制奠定基础,同时为其他甲壳类动物CHH家族基因的功能研究提及进化机制提供参考。本实验以口虾蛄眼柄为材料提取总RNA,首次通过RACE方法获得高血糖激素(CHH)基因全长cDNA序列。CHH基因全长2421bp,5’UTR长度为180bp,3’UTR为1821bp,开放阅读框(ORF)长420bp,编码139个氨基酸。预测蛋白二级结构α–螺旋23.74%,延伸链占23.02%,无规则卷曲占53.24%,预测分子量为15.47kD,等电点(pI)为7.049。CHH成熟肽包含6个CHH家族中位置保守的Cys残基,C端为GK,推断为ES型CHH基因。聚类分析表明:口虾蛄CHH和十足目CHH聚为同一个分支的两亚群,具有较近的亲缘关系,而后与十足目的MIH和GIH形成一分支。采用荧光定量PCR技术首次检测口虾蛄不同组织中CHH基因的表达量,CHH基因在血淋巴中表含量最高,在肠、眼柄、触角中有较高的表达量,在肌肉和卵巢中表达量相对较低,而在精巢中不表达。研究结果为进一步口虾蛄CHH多肽相关功能性研究和作用机制奠定基础,同时也为其他甲壳类动物CHH基因的研究及系统演化和分类系统提供借鉴。
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