【摘 要】
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鸡病毒性关节炎(Avian Viral arthritis,AVA)又名传染性性腱鞘炎,是由禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus virus,ARV)引起的鸡慢性传染病,以侵害跗关节、趾关节以及肌腱和心肌为特
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鸡病毒性关节炎(Avian Viral arthritis,AVA)又名传染性性腱鞘炎,是由禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus virus,ARV)引起的鸡慢性传染病,以侵害跗关节、趾关节以及肌腱和心肌为特征,该病在世界各地都有分布,对养鸡业带来很大的损失。ARVσC蛋白是ARV外壳蛋白中最小的一种蛋白,携带有ARV的特异性中和反应表面抗原,能刺激机体产生保护性中和抗体。本研究构建了减毒素沙门氏菌介导的ARVσC的基因疫苗,并对其免疫原性进行了初步研究。1、减毒沙门氏菌介导的ARVσC基因疫苗的构建及鉴定根据GenBank中发表的ARV S1133毒株的σC基因序列,设计一对引物,扩增出σC基因,将扩增的σC基因TA克隆至pMD-19T载体上,构建了重组质粒pMD19T-σC。核苷酸测序测定结果表明,克隆的基因片段大小为981 bp,与GenBank上发表的ARV常见毒株核苷酸序列的同源性在98%-99.8%之间;推导的氨基酸同源性在96.9%-99.6%之间。将σC基因克隆至pVAX1真核表达载体上,成功构建了真核表达质粒pVAX1-σC。将构建的真核表达质粒转染COS-7细胞,间接免疫荧光实验表明,该重组质粒能够在真核细胞中表达出具有反应原性的重组蛋白。将pVAX1-σC电转入减毒沙门氏菌SL7207,构建了重组减毒沙门氏菌SL7207(pVAX1-σC)。将重组减毒沙门氏菌以1.0×10~9CFU剂量口服接种6日龄SPF雏鸡,结果表明重组菌对雏鸡具有良好的安全性。2、减毒沙门氏菌介导的ARVσC基因疫苗的免疫特性的初步研究在对雏鸡免疫实验中,将SL7207(pVAX1-σC)以1.0×10~9CFU的剂量两次免疫雏鸡,抗体检测结果显示,二免后2周可诱导机体产生针对ARVσC蛋白的特异血清IgG抗体,抗体水平明显高于空载体对照组SL7207(pVAX1)和空白对照组(P<0.01)。攻毒实验结果表明,本实验研究的疫苗对实验鸡的保护率为66.7%。
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