目的：分离培养人表皮干细胞(epidermal stem cells ESCs)并研究观察其对裸鼠(BALB/c mice)全层皮肤缺损再上皮化的作用。 方法：1、人ESCs的分离培养和生物学特性的检测：用“Ⅳ型胶原粘附法”分离培养人ESCs后，应用倒置相差显微镜观察其细胞形态，用细胞免疫化学染色、流式细胞仪检测细胞周期。2、人表皮干细胞对裸鼠全层皮肤缺损再上皮化的实验研究：将培养获得的人ESCs用DAPI标记后，制备成细胞悬液注射于12只裸鼠背部的全层皮肤缺损创面，通过对创面愈合过程的大体病理HE染色观察、4’，6-二脒基-2-苯基吲哚(4’，6-diamidino-2-phenylindole DAPI)荧光染色和免疫组织化学染色检测裸鼠创面组织内人ESCs，研究ESCs对创面再上皮化的作用。 结果：1、用“Ⅳ型胶原粘附法”获得的细胞贴壁生长，分离孵育培养过夜后，细胞逐渐伸展形成铺路石样，细胞核较大，核浆比例大，大多相互聚集克隆生长形成细胞集落；细胞化学染色显示CK14、CK19、β1整合素呈阳性表达，CK10呈阴性表达；细胞周期分析ESCs处于G1期与S期的细胞比例之和为83.04％。其生物学特性符合表皮干细胞的特征。2、人ESCs对裸鼠全层皮肤缺损再上皮化作用的实验结果显示：ESCs组12只裸鼠伤后3d的创面愈合率为48.72±12.88％，与空白对照组12只裸鼠伤后3d创面愈合率31.55±14.72％相比，P＜0.05，差异有统计学意义；ESCs组在伤后7d的创面愈合率为95.11±6.11％，与空白对照组7d的创面愈合率78.33±10.17％相比，P＜0.05，差异有统计学意义。两组裸鼠伤后10天背部皮肤缺损创面全部愈合。DAPI荧光检测显示创面表皮层和真皮层有蓝色荧光阳性表达；空白对照组创面组织未见阳性表达。免疫组织化学染色显示ESCs组的创面CK10、CK14呈阳性表达；空白对照组创面组织未见阳性表达。ESCs组创面表皮层PCNA免疫组织化学染色为阳性(++)表达；空白对照组的为弱阳性(+)表达。且ESCs组创面表皮层的PCNA表达值(2.30±0.48分)要高于空白对照组的PCNA表达值(1.00±0.47分)，且P＜0.05，差异有统计学意义。 结论：“Ⅳ型胶原粘附法”是一种操作简单且可靠的分离培养ESCs的方法，用该方法得到的表皮干细胞可促进裸鼠全层皮肤缺损再上皮化，加速创面愈合的速度并提高创面的修复质量。