中国石竹查尔酮合成酶基因克隆、鉴定及表达分析

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查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是花色素合成途径中的关键酶。中国石竹(Dianthus chinensis)花色众多且抗逆性强,因此广泛应用于花坛、地被等。VIGS(virus-induced genesilencing)可快速、有效地鉴定植物基因功能。获得与中国石竹花色有关基因,对今后石竹属植物花色遗传改良具有重要意义。本试验根据Genbank中香石竹CHS基因(Z67982)设计特异引物,通过RT-PCR、3’-RACE在中国石竹中克隆获得DcCHS,采用VIGS对其功能进行了验证,并对其表达进行了分析,主要研究结果如下:1、克隆得到了片段大小为898bp的Dc CHS基因序列(KX893854)。2、以中国石竹不同花色花瓣为材料进行q RT-PCR分析,发现随花瓣颜色加深Dc CHS的表达量增加,表明Dc CHS可能与石竹花色有关。3、对Dc CHS不同片段设计引物,进行RT-PCR,分别构建了2个TRV2重组载体,农杆菌菌液侵染花蕾后会发现含pTRV2/Dc CHS407的出现白色或颜色变浅的现象,经q RT-PCR分析发现其CHS表达量下降,而含pTRV2/Dc CHS412的沉默效果不明显。表明Dc CHS与石竹花色有关,但不同的基因片段沉默效果不同。4、以中国石竹不同发育时期的花蕾为材料进行q RT-PCR分析,发现Dc CHS的表达量在花蕾生长前期最高,且显著高于生长中期和花前期,而生长中期和花前期的Dc CHS表达量无显著差异,表明查尔酮合成酶基因表达量随花蕾发育时期而下降。
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