黄瓜果实特异性基因CFSP-1启动子的克隆与功能分析

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pipijiayoua
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CFSP-1蛋白是本实验室通过蛋白质双向电泳的方法获得的黄瓜果实特异性蛋白,并已成功克隆到该蛋白的cDNA序列。   本研究以黄瓜基因组DNA为模板,PCR扩增获得CFSP-1的基因组DNA序列。将克隆得到的CFSP-1基因组DNA序列与其cDNA序列进行比较,发现该基因含有6个内含子,对得到的内含子序列进行分析,所有内含子的AT平均含量为67%,外显子序列为55%,内含子的AT含量明显高于外显子。在此基础上,采用RAPD替代TAIL-PCR中常用的随机简并引物,进行过多次TAIL-PCR,发现RAPD引物有时3端仅仅有4、5个碱基与模板结合就可以进行PCR扩增,为此,若每轮TAIL-PCR筛选10-20个RAPD引物,经过2-4轮就可以得到目的片段。本研究采用上述改良的TAIL-PCR方法成功获得该基因的5上游序列510 bp的启动子序列。用CFSP-1基因的启动子定向替换pBI121载体上的CaMV35S启动子,构建了pBI121-proCFSP载体,检测该启动子在黄瓜不同组织中启动gus报告基因的活性,结果表明CFSP-1基因启动子能够驱动其下游gus报告基因在黄瓜的果实中表达,而在黄瓜的茎和叶中基本无表达。本研究从黄瓜基因组中克隆到一个果实特异性基因CFSP-1的启动子,并通过构建载体pBI121-proCFSP,GUS染色验证其具有果实特异性表达活性,为进一步了解黄瓜果实的发育、探讨植物对其生长环境的适应机制以及更好地控制外源基因在转基因植物中的表达等奠定了基础。
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