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1目的观察苁归益肾胶囊治疗早期糖尿病肾脏疾病(DKD)患者中医临床症状、肾功能相关指标的变化,评价苁归益肾胶囊治疗早期DKD的临床疗效。并通过动物实验研究,观察苁归益肾胶囊对早期DKD模型大鼠血清中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及肾脏组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bax、半胱天冬酶(Caspase-3)蛋白水平表达的影响,进一步探讨苁归益肾胶囊治疗早期DKD的作用机制,为中医药治疗DKD提供新的实验室依据。2方法2.1临床研究于2017年6月至2018年6月期间,随机选取60例(此实验为探索性随机对照试验,未进行样本量估计)早期糖尿病肾脏疾病患者(均来自于安徽中医药大学第一附属医院内分泌科门诊和住院部),根据随机对照原则分为两组,治疗组和对照组各30例,对照组予以氯沙坦钾片(100mg qd),治疗组在对照组的基础上加用苁归益肾胶囊(0.4g/粒,每次4粒,一日三次),同时嘱两组患者积极控制饮食运动等糖尿病健康教育。总疗程24周。除记录年龄、性别等基本信息外,还要计算治疗前后两组肾虚血瘀中医证候积分、血糖(FPG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),尿微量白蛋白(m ALB),细胞间黏附分子-1(ICAM-1)等指标的变化。对苁归益肾胶囊治疗早期糖尿病肾病的临床效果做出评价。2.2实验研究选择清洁雄性SD大鼠65只,常规饲养1周后,随机选择10只作为空白组,55只为实验组,空白组予以普通饲料饲养,实验组予以高脂饲料饲养。在喂养4周后,腹腔注射STZ,建立2型糖尿病肾脏疾病(DKD)模型(造模3天内死亡4只,未达标准剔除9只,后期死亡6只),大鼠予以高脂饲料喂养,按照随机分配原则,分为西药组10只、苁归益肾胶囊高剂量组10只、苁归益肾胶囊低剂量组9只、模型组8只。每组按不同的剂量、药品予以灌胃,共12周。观察血清FPG、Hb A1c、BUN、Scr、ICAM-1以及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的情况。3结果3.1临床观察结果3.1.1总有效率:治疗6个月后,对照组和治疗组总有效率分别为56.3%和79.3%,差异有统计学意义(P<0.05);3.1.2中医证候积分:治疗前,两组中医证候积分无明显差异(P>0.05);治疗6个月后,治疗组中医证候积分下降,差异有统计学意义(P<0.05);对照组证候积分较前下降,但无统计学意义(P>0.05);治疗组明显优于对照组(P<0.05)。3.1.3 FPG、2h PG、Hb A1c:治疗6个月后,FPG、2h PG、Hb A1c均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,治疗组的FPG水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),治疗组的2h PG、Hb A1c虽降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。3.1.4 Scr、BUN、m ALB、ACR:治疗前,两组患者的Scr、BUN、m ALB、ACR的组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,治疗组和对照组的Scr、BUN、m ALB、ACR较之前明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,治疗组Scr、BUN、m ALB、ACR降低明显,差异有统计学意义(P<0.05);3.1.5血清ICAM-1:治疗前,两组患者血清ICAM-1无明显差异(P>0.05),治疗后,治疗组和对照组血清ICAM-1均降低,差异有统计学意义(P<0.05),与对照组比较,治疗组血清ICAM-1降低更加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。3.2动物实验结果3.2.1大鼠的一般情况变化:实验中,空白组大鼠毛色光泽柔顺,精神状态良好,运动灵活,食量增加,体重增加,粪便成形,尿量正常。模型组大鼠明显多饮,多食,多尿,精神萎靡,毛发枯黄,倦卧懒动,尾巴苍白湿冷,粪便湿,少数大鼠在造模6周后,逐渐出现DM并发症。给药组的大鼠精神状态好转,饮水、食量等方面较模型组改善。3.2.2大鼠体重:治疗前,与空白组比较,其余组大鼠体重较体重明显降低(P<0.05);治疗后,与模型组比较,西药组、中药低剂量组体重明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);中药高剂量组较模型组大鼠体重升高明显,差异显著(P<0.01),说明高剂量的苁归益肾胶囊可以改善DKD的消瘦症状。3.2.3 DKD大鼠血糖:与空白组比较,其余各组大鼠空腹血糖均升高,差异显著(P<0.01);与模型组相比,高剂量中药组血糖明显下降(P<0.01),西药组及低剂量中药组的大鼠血糖虽降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。3.2.4 DKD大鼠BUN,Scr:与空白组相比,模型组与用药组大鼠BUN,Scr,均升高(P<0.05);与模型组相比,中药高剂量组、西药组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);中药低剂量组大鼠BUN,Scr均下降,差异无统计学意义(P>0.05)。3.2.5 DKD大鼠24h尿蛋白量:与空白组相比,模型组与治疗组的24h尿蛋白量均明显升高(P<0.01);治疗12周后,与模型组比较,西药组及中药各剂量的24h尿蛋白量均明显降低(P<0.05);与西药组比较,中药高剂量组的24h尿蛋白量无明显差异(P>0.05);中药低剂量组的24h尿蛋白量有明显差异(P<0.05)。3.2.6 DKD大鼠血清ICAM-1水平:与空白组比较,模型组与各用药治疗组的DKD大鼠血清ICAM-1水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,中药低剂量组ICAM-1水平有所降低,但无统计学意义(P>0.05),西药组、中药高剂量组的血清ICAM-1水平明显降低(P<0.05)。3.2.7大鼠肾脏病理形态学:空白组大鼠肾脏组织结构正常,未见增生及纤维化。毛细血管腔清晰,肾小管上皮无水肿,管腔内未见蛋白管型。模型组大鼠肾组织可见毛细血管腔明显变窄。肾小管上皮浊肿,甚至坏死,胞浆内可见红染颗粒,且有部分空泡样变,并有轻度间质纤维化,肾间质可见炎细胞浸润。与模型组相比,各治疗组大鼠肾脏HE染色见肾小管上皮细胞亦有变性与浊肿,但炎性细胞浸润明显减轻。3.2.8肾脏组织Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达(Western blot):与空白组相比,各模型组与用药组的Bax、Caspase-3表达明显上调,Bcl-2表达下调,差异显著(P<0.01);与模型组比较,各用药组的Bax、Caspase-3蛋白的表达明显降低,Bcl-2蛋白的表达明显升高(P<0.05);与西药组比较,CGYSC(高)组大鼠肾脏组织的Bax、Caspase-3蛋白水平明显下调,Bcl-2蛋白水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);与西药组比较,CGYSC(低)组Bcl-2降低、Bax、Caspase-3蛋白的表达升高,有明显差异(P<0.05)。4结论4.1苁归益肾胶囊可有效改善早期DKD患者肾虚血瘀证候,降低空腹血糖、糖化血红蛋白,同时降低血尿素氮、血清肌酐,尿微量白蛋白,改善患者的肾功能,延缓DKD进展。4.2苁归益肾胶囊降低了DKD大鼠的血糖、尿微量白蛋白,改善了Scr、BUN,其机制可能与下调促凋亡的Bax、Caspase-3蛋白水平,上调抑制凋亡的Bcl-2蛋白水平,减少了肾脏相关细胞凋亡水平,减轻肾脏损伤,达到保护肾脏的效果。