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研究EMT调控因子在肝细胞肝癌中(hepatocellular Carcinoma,HCC)的表达及其与复发转移的关系,进一步探讨EMT调控因子之间的相互关系及其与预后的关系,初步探讨肝癌侵袭转移的分子机制。方法收集天津医科大学附属肿瘤医院病历随访资料完整的HCC病例97例,应用免疫组化方法检测Twist1、Twist2、Snail、Slug、E-cadherin、MMP-2、MMP-9在HCC中的表达,采用Mattern积分法分析它们在复发与转移组和无复发与转移组两组间差别、它们之间的相互关系及它们与生存预后的关系。在97例HCC中复发与转移组49例,平均生存时间为26.423±3.279个月,中位生存时间为21个月；无复发与转移组48例,平均生存时间46.75±3.325个月,中位生存时间为56个月,复发与转移组生存时间较无复发与转移组短(P=-0.000)。复发与转移和临床分期密切相关,临床分期为Ⅲ、Ⅳ的病人生存时间较Ⅰ、Ⅱ期的病人短(χ2=41.399,P=0.000)；肿瘤体积越大,越容易出现复发与转移(χ2=7.506,P=0.006)；病理分级越高,病人越容易出现复发与转移(χ2=4.118,P=0.042)；复发与转移和性别,、年龄无关(χ2=0.639,P=0.424；χ2=0.112,P=0.738)。2.1.1Twist1阳性表达产物呈棕黄色,主要定位于肝癌细胞的细胞浆和细胞核,呈弥漫分布。复发与转移组Twist1细胞核阳性表达率为48.98%(24/49),无复发与转移组为18.75%(9/48),复发与转移组Twist1细胞核表达高于无复发与转移组有统计学意义(χ2=9.871,P=0.002)。采用Mattern积分法,Twist1细胞浆表达量在复发与转移组和无复发与转移组两组间差别有统计学意义,复发与转移组高于无复发与转移组(Z=-3.619,P=0.000)。2.1.2Twist2呈阳性表达于肝癌细胞的胞浆中,弥漫分布。复发与转移组Twist2的阳性表达率为57.14%(28/49),无复发与转移组的阳性表达率为50%(24/48),镜下采用Mattern积分法,所得的Twist2在两组间的表达量的差别不具有统计学意义(Z=-0.239,P=0.811)。2.1.3 Snail作为锌指结构家族重要成员,主要表达于肝癌细胞的细胞核中,呈弥漫分布。复发与转移组阳性表达率为69.39%(34/49),无复发与转移组的阳性表达率为47.92%(23/48),复发与转移组Snail阳性表达率高于无复发与转移组(χ2=4.613,P=0.032)。2.1.4 Slug作为Snail同家族的分子,它表达于肝癌细胞的细胞膜和部分细胞浆以及部分血管的内皮细胞,复发与转移组Slug的阳性表达率为67.35%(33/49),无复发与转移组的阳性表达率50% (24/48),采用Mattern积分法,Slug在两组间表达量的差别不具有统计学意义(Z=-1.911,P=0.056)。E-cadherin是重要的上皮粘附分子,它表达于肝癌细胞的细胞膜,部分肝癌组织表达减少,有的肝癌组织表达缺失。复发与转移组阳性表达率为44.90%(22/49),无复发与转移组的阳性表达率为56.25%(27/48),采用Mattern积分法,E-cadherin在两组间表达量的差别具有统计学意义(Z=-2.205,P=0.027),E-cadherin在复发与转移组的表达低于无复发与转移组。2.3.1 MMP-2作为基质金属蛋白酶家族重要的成员之一,与侵袭转移密切相关,它表达于肝癌细胞的细胞浆中。复发与转移组的阳性表达率为69.39%(34/49),无复发与转移组的阳性表达率为75%(36/48),镜下采用Mattern法,MMP-2在两组间表达量的差别有统计学意义(Z=-2.623,P=0.009),MMP-2在复发与转移组的表达高于无复发与转移组。2.3.2 MMP-9表达于肝癌细胞的胞浆中,少数病例出现细胞核表达。复发与转移组的阳性表达率为67.35%(33/49),无复发与转移组的阳性表达率58.33%(28/48),镜下采用Mattern积分法,MMP-9在两组间表达量的差别具有统计学意义(Z=-2.028,P=0.043),MMP-9在复发与转移组的表达高于无复发与转移组。在复发与转移组,从各分子阳性率分析它们之间的相互关系得出,Twist1在细胞核中的表达与E-cadherin成负相关(P=0.043),与MMP-9成正相关(P=0.047),Twist1细胞核阳性率越高,MMP-9的阳性率越高,E-cadherin的阳性率越低；Snail细胞核表达与E-cadherin成负相关(P=0.048),Snail细胞核阳性率越高,E-cadherin阳性率越低,而Twist2和Slug与E-cadherin、MMP-2、MMP-9均无关(P>0.05)。4.1单因素生存分析：Twistl细胞核表达、细胞浆表达、Snail、E-cadherin和MMP-9阳性组病人与阴性组病人生存时间比较差别具有统计学意义,Twist1-nuclear、Twist1-cytoplasm、Snail和MMP-9阳性组的生存时间较阴性组病人的生存时间少(P=0.000,P=0.002,P=0.028,P=0.039),E-cadherin阴性组的生存时间较阳性组少(P=0.002)。而Twist2、Slug、MMP-2阳性组病人与阴性组病人生存时间比较差别无统计学意义(P=0.336,P=0.293,P=0.805)。4.2 EMT调控因子复合表达生存分析：Twist1、Twist2、Snail和Slug作为EMT过程的上游因子,在不同分子之间的复合表达中,存在Twist1或Snail的复合表达中,双阳性组病人的生存时间较双阴性组短,Twist1-nuclear和Snail双阳性组病人的生存时间较双阴性病人的生存时间(P=0.000),Twist1-cytoplasm和Snail双阳性病人的生存时间较双阴性病人的生存时间短(P=0.001),且Twist1和Snail双阳性组病人的生存时间最短。4.3 EMT调控因子COX回归分析：Twist1细胞核、细胞浆表达的风险度分别是2.110和1.952,具有统计学意义(P=0.015,P=0.029)。Snail的风险度是1.743,无统计学意义(P=0.063)。1.HCC的复发与转移和肿瘤体积、临床分期、病理分级密切相关,和性别、年龄无关。肿瘤体积越大,复发与转移率越高,肿瘤临床分期越晚、病理分级越高,越容易出现复发与转移。2.在HCC中,bHLH家族转录因子Twist1通过与E-cadherin的E-box结合下调E-cadherin的表达,E-cadherin的表达减少或缺失以致肝癌细胞极性消失,细胞间的粘附性下降,同时激活基质金属蛋白酶的表达,降解细胞外基质,促进肝癌的复发与转移,从而导致病人的不良预后,锌指结构蛋白Snail通过与E-cadherin的E-box结合下调E-cadherin的表达,E-cadherin的表达减少或缺失以致肝癌细胞极性消失,细胞间的粘附性下降,促进癌细胞的浸润转移,与患者的不良预后有关。而Twist2和Slug与HCC的复发转移及预后无关。3.EMT调控因子中Twist1、Snail表达与预后密切相关,Twist2和Slug的表达与预后无关,且Twist1和Snail复合表达导致了病人更差的预后,二者复合表达可以作为患者预后不良的标志。其中Twist1在HCC的复发与转移及病人的不良预后中发挥着更大的作用。