【摘 要】
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目的通过观察人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导乳鼠心肌细胞肥大及能量代谢的调节作用,及对沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)表达的影响,以探讨人参皂苷Rg1对心肌肥厚调节作用的相关信号机制。方法采用AngⅡ(0.1μmol/L)诱导原代培养的SD乳鼠心肌细胞,造成离体心肌细胞肥大模型,观察给予心肌肥大模型不同浓度(12.5、25、5
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目的通过观察人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导乳鼠心肌细胞肥大及能量代谢的调节作用,及对沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)表达的影响,以探讨人参皂苷Rg1对心肌肥厚调节作用的相关信号机制。方法采用AngⅡ(0.1μmol/L)诱导原代培养的SD乳鼠心肌细胞,造成离体心肌细胞肥大模型,观察给予心肌肥大模型不同浓度(12.5、25、50μmol/L)的人参皂苷Rg1及SIRT1特异性阻断剂EX527(1μmol/L)对肥大心肌细胞的细胞体积、蛋白质含量、细胞外液游离脂肪酸(FFA)、三磷酸腺苷(ATP)、单磷酸腺苷(AMP)含量、心肌细胞线粒体中细胞色素C氧化酶(CCO)活性、心肌细胞胞浆中细胞色素C(Cyt-C)表达、心肌细胞心房钠尿肽(ANP)、SIRT1及PGC-1α表达的影响。处理完成后,消化分离各处理组心肌细胞,倒置显微镜下放大400倍结合图像分析系统测定心肌细胞直径并计算细胞体积;采用考马斯亮蓝(Bradford)法检测各处理组心肌细胞裂解液中蛋白质含量;Western blot免疫电泳法测定各组心肌细胞中ANP、SIRT1及PGC-1α的蛋白表达;采用Elisa法检测各处理组心肌细胞细胞外液中FFA、ATP及AMP含量并计算ATP/AMP比值;低温离心法分离心肌细胞线粒体,并用紫外分析法测定心肌细胞线粒体中CCO活性,Western blot法测定各组心肌细胞胞浆中Cyt-C蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型对照组心肌细胞体积、蛋白质含量及FFA含量明显升高,ATP/AMP比值降低,CCO活性下降,ANP和胞浆Cyt-C表达上调,SIRT1及PGC-1α的表达下调。与模型对照组比较,人参皂苷Rg1中、高剂量(25、50μmol/L)组心肌细胞的细胞体积、蛋白质含量和FFA含量降低,ANP和胞浆Cyt-C表达下调,ATP/AMP比值和CCO活性升高,人参皂苷Rg1中剂量(25μmol/L)组SIRT1及PGC-1α的表达上调。人参皂苷Rg1对心肌细胞体积、蛋白质含量、ANP和胞浆Cyt-C表达及心肌细胞外液FFA含量,ATP/AMP比值和CCO活性作用随人参皂苷Rg1浓度增高而增强。EX527对肥大心肌细胞各项指标的影响无统计学差异,应用EX527后人参皂苷Rg1降低肥大心肌细胞的细胞体积、蛋白质含量和ANP蛋白表达的调节作用,对于心肌细胞外液FFA含量、ATP/AMP比值、CCO活性和胞浆Cyt-C及PGC-1α表达上调作用被部分阻断。结论人参皂苷Rg1对AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大具有抑制作用,并能改善肥大心肌细胞的能量代谢,其作用机制与其上调SIRT1进而上调PGC-1α表达有关。
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