目的:探究在载脂蛋白E基因敲除小鼠(即Apo E-/-小鼠)颈总动脉粥样硬化的3个时间点自噬水平的变化情况。方法:(1)40只6周龄的SPF级雄性Apo E-/-小鼠,先给与普通饲料喂养2周,随后随机分成对照组(10只)与模型组(30只)。对照组进行假手术(Apo E-/-小鼠右侧颈总动脉旁放置硅胶管)处理,而后继续普通饲料喂养8周;模型组给与手术(右侧颈总动脉外套置硅胶管)处理,手术后随机分成3组(2周组、4周组、8周组),每组各10只,并且均换成高脂饲料,分别喂养2周、4周、8周后处死。(2)分离并剪断Apo E-/-小鼠的股动脉进行取血,检测每只Apo E-/-小鼠血清中甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL_c)的含量。(3)Apo E-/-小鼠取血后处死,分离取出套管侧颈总动脉,固定后做石蜡切片,HE染色,应用光学显微镜观察每组血管壁结构的变化。(4)离体的套管侧颈总动脉经固定后,做超薄切片并染色,应用透射电镜观察每组小鼠颈总动脉组织巨噬细胞的超微结构。(5)提取各组Apo E-/-小鼠套管侧颈总动脉组织的总RNA,经反转录后,应用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测每组小鼠颈总动脉组织中ATG5、Beclin1的m RNA的相对表达量。(6)提取各组Apo E-/-小鼠套管侧颈总动脉组织中的总蛋白,应用western blot检测每组小鼠颈总动脉组织中ATG5、Beclin1蛋白的相对表达量。结果:(1)与对照组相比较,模型组Apo E-/-小鼠的血脂水平均升高(P<0.05);模型组中TG和LDL_c的表达水平随着套管手术时间延长而逐渐升高(P<0.05)。(2)组织病理学观察显示,对照组Apo E-/-小鼠颈总动脉管壁结构比较完整,且弹性膜较为丰富。2周组小鼠管壁结构仍较完整,但是一小部分管壁增厚并见有少量细胞浸润。4周组小鼠管壁结构较为凌乱,而且见有泡沫细胞、炎性细胞的浸润。8周组小鼠管壁明显增厚而且有大量泡沫细胞、炎性细胞浸润,弹性膜结构破坏且明显减少,管腔狭窄。(3)透射电镜观察显示,与对照组相比较,模型组Apo E-/-小鼠颈总动脉组织巨噬细胞中的脂滴和自噬体数目均明显增多,4周组巨噬细胞内脂滴和自噬体数目明显多于2周组,8周组巨噬细胞内的脂滴数目明显多于4周组,但其自噬体数目远远少于4周组。(4)实时荧光定量PCR结果显示,2周组Apo E-/-小鼠颈总动脉组织中ATG5、Beclin1的m RNA的相对表达量与对照组无明显差异(P>0.05),4周组和8周组ATG5、Beclin1的m RNA的表达均高于对照组(P<0.05);4周组ATG5、Beclin1的m RNA的表达均高于2周组和8周组,而且,8周组ATG5、Beclin1的m RNA的表达高于2周组(P<0.05)。(5)western blot结果显示,2周组Apo E-/-小鼠颈总动脉组织中ATG5、Beclin1蛋白的相对表达量与对照组相比较无明显差异(P>0.05),4周组和8周组ATG5、Beclin1蛋白的表达均高于对照组(P<0.05);4周组ATG5、Beclin1蛋白的表达均高于2周组和8周组,而且,8周组ATG5、Beclin1蛋白的表达高于2周组(P<0.05)。结论:在Apo E-/-小鼠颈总动脉粥样硬化的疾病过程中,自噬在起始阶段不断激活,自噬水平逐渐升高,但是,自噬水平在动脉粥样硬化的某一时间点(本实验中为套管手术4周后)将会达到峰值,而后逐渐降低。