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目的:全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,atRA)是生物体内存在的正常脂溶性生理活性物质。除在胚胎发育中是器官、系统正常结构形成的内源性形态原(morphogen)外, atRA对促进生物的正常分化、免疫调节、抗感染,以及抑制(肿瘤)细胞生长、增殖,诱导(肿瘤)细胞分化、凋亡等方面具有广泛的生物学作用。atRA是由维生素A经两步氧化代谢而成。动物辅酶II-依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase /reductase,NRDR),是一种参与atRA合成代谢的重要视黄醇脱氢/还原酶,广泛分布于各种哺乳动物组织。编码人的NRDR基因定位于染色体14q11.2。该基因共有三个拷贝,串联成簇,分别为DHRS4,DHRS4L2,DHRS4L1,前二者的同源性为97.5%。在DHRS4与DHRS4L2,DHRS4L2与DHRS4L1之间各有一约20000 bp的插入片段(insertion 1and insertion 2)。既往的研究表明,在肿瘤细胞中,尤其是人神经母细胞瘤中,存在很多的DHRS4L2基因的选择性剪接亚型。现有的DHRS4L2转录本的研究结果显示,其转录产物多缺乏外显子1(E1),所替代的第一个外显子均为DHRS4L2基因参考序列的E1上游大约19kb处的一段序列,命名为外显子a(Ea)。已知Ea在正常的人脑,睾丸,胎盘和食道癌等组织中均表达。然而,在人肝脏中是否存在同样的剪接模式和剪接亚型仍缺乏研究。DHRS4基因簇序列分析表明Ea和DHRS4L2 E1上游区域均存在CpG岛。对DHRS4基因簇的CpG岛进行甲基化状态检测时发现,DHRS4L2 E1前的CpG位点完全甲基化而Ea以及DHRS4的第一个外显子前的CpG岛则处于非甲基化状态,提示DHRS4L2的转录可能受CpG岛甲基化的调节。本研究鉴定正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞Hep-G2 DHRS4L2的选择性剪接新亚型,并探讨其表达调控机制与甲基化的关系。方法:应用RT-PCR,3’-RACE和生物信息学方法发现并鉴定DHRS4L2基因的选择性剪接新亚型;去甲基化药物5-aza-dC处理HL-7702和Hep-G2细胞5天,通过RT-PCR,real-time PCR方法检测这两种细胞系DHRS4L2的表达情况的变化。结果:发现了2个新的DHRS4L2剪接亚型DHRS4L2A和DHRS4L2A3,分别缺失外显子1以及外显子1和3;5-aza-dC处理后对正常人肝细胞和肝癌细胞中DHRS4L2的转录均有一定作用。结论:获得2个新的DHRS4L2剪接亚型,并发现DHRS4L2的表达和甲基化调控相关,因DHRS4L2第一外显子启动子区域甲基化程度高,出现选择性第一外显子Ea表达的现象。去甲基化处理后,含有外显子1的DHRS4L2的基因产物增加。且甲基化的调控作用在正常与肿瘤细胞之间存在差异,其机制尚待进一步探讨。