论文部分内容阅读
第一部分七氟醚对大鼠后爪趾部切口疼痛模型脊髓星形胶质细胞激活和疼痛行为的影响目的观察七氟醚对大鼠后爪趾部切口疼痛模型的疼痛行为和脊髓星形胶质细胞激活程度的影响。方法选取健康成年雄性SD大鼠80只,随机分为对照组和七氟醚处理组（n=40）。麻醉平稳后建立后爪趾部切口疼痛模型。分别于术前、术后6h、术后1、3、5d各随机选取8只大鼠,计算累计疼痛评分并用von Frey丝测定机械缩足反射阈值后立即处死大鼠。取L4-6脊髓,分别用免疫组织荧光法观察胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色情况,荧光实时定量PCR测定GFAP mRNA表达,以反映星形胶质细胞的激活情况。结果两组的累计疼痛评分在术后6h最高,之后逐渐降低,术后5d即恢复至正常。两组的机械缩足反射阈值在术后迅速降低,此后逐渐升高。七氟醚处理组的阈值于术后5d恢复至正常,而对照组的阈值在术后5d仍低于正常。对照组L4-6脊髓的同侧脊髓背角的GFAP染色在术后6h即开始增强,于术后3d达到峰值,而七氟醚处理组同侧脊髓背角的GFAP染色则轻度增强,没有明显的峰值。荧光实时定量PCR测定则提示两组L4-6脊髓的GFAP mRNA表达在术后6h即开始增强,持续至术后5d,但没有明显的峰值,而七氟醚处理组的GFAP mRNA表达整体要比对照组低。结论大鼠脊髓背角星形胶质细胞的激活可能在后爪切开术后机械痛敏的发生和维持中发挥作用,而七氟醚则可能通过抑制脊髓星形胶质细胞的激活来减弱术后的机械痛敏。第二部分七氟醚对大鼠脊髓星形胶质细胞的体外激活及对ERK信号传导通路的影响目的观察七氟醚（Sevo）对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞激活的影响,并探讨其对ERK信号传导通路的可能作用。方法采用体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞,分为对照组和七氟醚处理组,在谷氨酸（Glu）作用时间不同的情况下,应用cck-8活细胞增殖测定法、透射电镜和Western blot检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）来观察星形胶质细胞的激活情况。再将细胞分为6组:对照组、PD98059处理组、PD98059+七氟醚处理组、谷氨酸处理组、PD98059+谷氨酸处理组、PD98059+谷氨酸+七氟醚处理组,应用Western blot检测测定星形胶质细胞GFAP和磷酸化cAMP反应元件结合蛋白（pCREB）的表达变化。结果cck-8活细胞增殖测定法显示,在谷氨酸浓度为100μmol/L的情况下,对照组和七氟醚处理组的吸光度比值在20min后均显著增加,之后两组在各时间点的吸光度比值无显著差异,但七氟醚处理组的吸光度比值比对照组低。透射电镜下细胞形态学观察结果发现,往谷氨酸处理后的各时间点,对照组的多数细胞核内常染色体较多,胞浆内有丰富的粗面内质网、高尔基体、核糖体和线粒体,并可见许多分泌泡和溶酶体,而相应时间点七氟醚处理组细胞的胞浆内细胞器则比对照组少。Western blot检测显示,七氟醚处理组各时间点的GFAP蛋白表达量比对照组少,PD98059+Sevo组的GFAP和pCREB蛋白表达量均较PD98059组和对照组少,PD98059+Glu+Sevo组的GFAP和pCREB蛋白表达量均较PD98059+Glu组和对照组少。结论七氟醚能有效抑制谷氨酸对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞的激活作用,其对星形胶质细胞激活的抑制作用可能是通过抑制ERK信号转导通路中ERK以下的下游——抑制CREB的磷酸化来实现的。