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背景:由于血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）与口腔黏膜下纤维化（oral submucous fibrosis,OSF）后期血管减少有着密切关系,且目前应用VEGF基因转染恢复血管生成技术较为成熟。在前期小鼠OSF模型成功构建的基础上,本实验拟采用VEGF基因转染恢复小鼠口腔黏膜下纤维化血管生成。目的:（1）通过AD-EGFP-VEGF165(adenovirus-enhanced green fluorescent protein-vascular endothelial growth factor165,携带人血管内皮细胞生长因子165基因及绿色荧光蛋白的腺病毒),体外转染小鼠成纤维细胞,观察转染效率及转染前后VEGF表达情况。（2）通过小鼠颊黏膜下组织注射AD-EGFP-VEGF165,了解VEGF基因转染法恢复小鼠OSF血管生成的有效性以及可行性。方法:（1）体外培养小鼠颊部成纤维细胞,并将已构建成功的AD-EGFP-VEGF165、AD-EGFP（adenovirus-enhanced green fluorescent protein,携带绿色荧光蛋白的腺病毒）分别转染细胞,通过RT-q PCR、ELISA检测转染前后VEGF的表达量,MTT检测转染后细胞的增殖活力。（2）将40只小鼠随机分为实验组30只,对照组10只,对照组自由饮用无菌水,实验组自由饮用无菌水配成1000mg/L的槟榔碱溶液,20周后,随机取两组小鼠各5只,取其颊部组织通过H.E（Hematoxylin and eosin staining,苏木素-伊红）、Masson、V-G（Van Gieson）染色,观察其组织结构,确定OSF样改变,为后期动物实验奠定基础。（3）将15只OSF小鼠随机平均分成3组,将等量的AD-EGFP-VEGF165、AD-EGFP、生理盐水分别注射于OSF小鼠颊黏膜下组织,观察转染前后各组VEGF表达以及局部组织血管生成情况。结果:（1）当用MOI（multiplicity of infection,感染复数）=100的腺病毒转染小鼠成纤维细胞72h后,转染效率最高。RT-qPCR和ELISA结果示:AD-EGFP-VEGF165转染成纤维细胞72h后均可有效表达VEGF（p<0.05）;ELISA检测培养1周细胞上清液中VEGF蛋白变化,结果示:其蛋白含量在第6天达高峰。MTT结果示:转染组(AD-EGFP-VEGF165)与未转染组细胞吸光光度值无明显差异（p<0.05）。（2）槟榔碱饮水法喂养小鼠20周后,实验组小鼠颊部组织可见OSF样改变。（3）注射OSF小鼠颊黏膜下组织6天后,实验组AD-EGFP-VEGF165组可有效表达VEGF（p<0.05）,并且颊黏膜下组织可见VEGF阳性表达,而AD-EGFP组和生理盐水组未见阳性表达。CD34染色后,实验组AD-EGFP-VEGF165组微血管数量较对照组以及转染前明显增加（p<0.05）。结论:（1）MOI值为100时,AD-EGFP-VEGF165转染小鼠成纤维细胞后,可有效表达VEGF且不影响细胞生物学特性。（2）槟榔碱饮水法喂养小鼠20周后,实验组小鼠颊部组织可见OSF样改变。（3）AD-EGFP-VEGF165转染OSF小鼠颊黏膜下组织后,可有效表达VEGF并促进局部血管生成。