多型FMDV的VP1表位基因在S-层蛋白嵌入型亚单位疫苗载体的构建及其初步鉴定

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:mimidong
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口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth virus disease, FMDV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病,主要感染牛、猪和羊等多种家畜和野生哺乳动物,对畜牧产业和国民经济造成严重的损失。FMD已经成世界性分布。虽然化学方法灭活的全病毒疫苗在FMD的预防和控制过程中发挥着重要的作用,但是,在疫苗应用实践中凸显出很多不足。如纯化病毒颗粒难度大,病毒株储存条件苛刻,疫苗接种免疫效果不稳定等。更为重要的潜在危险还有在疫苗大规模生产过程中,FMDV的未完全灭活和来自疫苗生产期间从生物安全设施中逃脱的活病毒等。此外,多年以来我国的FMD疫情表现了0、A、Asia I多个血清型交替流行,单一种类型疫苗难以成效,导致疫苗免疫效果不尽人意。本研究应用PCR方法从嗜酸性乳杆菌基因组DNA中成功扩增出约1200bp的S-层蛋白全基因。应用CPH models-3.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/CPHmodels)、 Swiss-Model和Swiss-PdbViewer等3种在线软件成功预测了乳杆菌SLP的高级结构。将s1p基因克隆到原核表达载体pGEX4t-3中,成功构建了原核表达载体pGEX-slp。经IPTG诱导表达而获得的GST-SLP融合蛋白大小为70kDa。相继研究中将0、A、Asia I等3型FMDV的VPl特定表位基因嵌入到乳杆菌S-层蛋白原核表达载体pGEX-slp中,并转化到大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting鉴定,结果表明VP1融合蛋白在大肠杆菌中表达量是有限的,融合蛋白大小约为80kDa。本研究为进一步研究多型FMDV VP1表位基因嵌入型亚单位基因工程疫苗奠定基础。
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