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背景目前，在世界范围内，肺癌是发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一，它的病理类型主要分为两种：一是进展速度较快的小细胞癌（small cell lungcarcinoma,SCLC）,占总体比例的13—15%左右，二是非小细胞癌(non-small celllung carcinoma,NSCLC)，包括腺癌、鳞癌，大细胞癌，神经内分泌癌等，占总体比例的85%左右，其中腺癌是发病率最高的肺癌。导致肺癌预后较差的原因有很多方面，大部分患者发现肺癌时已处于晚期是预后差的关键因素之一,因此早期发现和手术仍然是治疗效果最好的措施。对于中晚期的肺癌患者，主要的治疗手段有化学药物治疗、放射性治疗、生物靶向治疗等。这些治疗手段有一定的疗效，但患者耐受性差、副作用大、容易复发，特别是化学药物治疗、放射性治疗。肺癌的浸润和转移也是影响患者疗效和生存时间的关键因素，明确的发病和转移机制目前仍然不清楚，因此缺乏有效的治疗手段。由于肺癌发病率高，预后差，目前缺乏有效的治疗手段，积极探索肺癌发发展的生物学机制，对于早期诊断、减少复发和转移，以及治疗肺癌的新方新策略均具有现实意义。微小RNA，即microRNA（miRNA），是由22个左右的核糖核苷酸组成的非编码、小分子单链RNA，在物种间和进化上具有高度保守性，几乎所有的真核细胞生物都可以表达。MicroRNA以完全或者不完全互补结合的方式与mRNA的3’端非编码区（3’-UTR）相互作用，促进mRNA降解，抑制mRNA翻译。MicroRNA对很多基因都有调控作用，在细胞的生长发育、分化、增殖、凋亡、细胞周期等细胞生物学行为都起着十分重要的作用。近年越来越多的研究发现，在很多肿瘤组织和肿瘤患者血清中，miRNA有过表达或者低表达的现象，并且绘制了不同肿瘤组织的miRNA表达谱。进一步的研究表明，miRNA在肺瘤发生、发展及转移发挥重要作用。miRNA-96是miRNA-183家族（miRNA-96，miRNA-182，miRNA-183）成员，在进化上高度保守，位于人类7号染色上。FOXO3属于FOXOs家族（FoxO1,FoxO3, FoxO4and FoxO6），这一类转录因子的特点是鲜明的叉头DNA结合域。FOXO3的异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关，癌症中常见的是FOXO3基因的下调，因此FOXO3被称为肿瘤抑制器。生物学信息分析FOXO3的3’-UTR具有2个序列保守的miRNA-96的结合位点，结合后抑制FOXO3的表达。在人乳腺癌组织中和乳腺癌细胞系中高表达的miRNA-96通过下调转录因子FOXO3起到促进肿瘤细胞增殖的作用。在人肝细胞癌中miRNA-96的表达抑制可以增加FOXO1、FOXO3的表达水平，以此减少肝癌细胞系的增殖和集落形成。在非小细胞肺癌（non-small cell lung carcinoma,NSCLC）组织和相应患者血清中，已有证实miRNA-96持续和显著高表达。Wangyu Zhu等人利用70对NSCLC组织和相匹配的癌旁组织、44例正常人血清样本，验证了miRNA-183家族（包括miRNA-96）在癌组织中、患者血清中高表达,并且在肺腺癌细胞系A549、H1299、SPC-A1，肺小细胞癌细胞系NCI-H466，肺大细胞癌细胞系NCI-H460中表达增高。miRNA-96在NSCLC组织中及血清中研究报道较多，但在细胞水平及其下游作用靶点国内外研究较少。目的：探讨miRNA-96对人肺腺癌细胞系A549增殖和凋亡能力的影响及其对FOXO3的调控作用。方法：1.细胞培养及miRNA-96inhibitor设计人肺腺癌细胞系A549用DMEM高糖培养液、胎牛血清培养，miRNA-96inhibitor由上海生工生物公司设计并合成。2.细胞转染采用电穿孔转染技术将miRNA-96inhibitor转入A549细胞内。实验分组三组：实验组（miRNA-96inhibitor），对照组（scramble），空白组（blank）。转染后24～48小时后进行相关实验及指标检测。3.指标检测采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测干扰后细胞内FOXO3mRNA的表达量，采用western blotting技术检测干扰后FOXO3蛋白质的表达量，CCK—8技术检测转染后细胞增殖能力，采用细胞划痕实验检测转染后细胞迁移能力，采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡情况。4.统计学处理采用SPSS17.0统计软件分析。该实验采用单因素方差分析进行统计分析。结果：1.转染后，FOXO3mRNA及FOXO3蛋白质表达量均显著增高RT-PCR结果显示实验组FOXO3mRNA的表达量显著高于对照组和空白组。Western blotting结果显示FOXO3蛋白质的表达量显著高于对照组和空白组。2.细胞迁移能力细胞划痕实验结果显示，实验组细胞迁移距离小于对照组和空白组，差异具有统计学意义(P <0.05)，而对照组和空白组之间差异无统计学意义(P>0.05)。3.细胞增殖能力CCK-8试验结果显示，实验组细胞增殖率显著小于对照组和空白组，差异具有统计学意义(P <0.05)，而对照组和空白组之间差异无统计学意义(P>0.05)。4.细胞凋亡流式细胞术结果显示，实验组细胞凋亡率显著高于对照组和空白组，差异具有统计学意义(P <0.05)，而对照组和空白组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1.将特异性的miRNA—96inhibitor转染入A549细胞内，可促进FOXO3mRNA及蛋白质的表达。2. FOXO3表达上调后，A549的迁移能力和增殖能力显著降低，凋亡增加。3. FOXO3和miRNA—96具有相关性，miRNA—96通过调控FOXO3而发挥基因调控的功能。