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近年来提出一种不同于自噬和坏死性凋亡的新的细胞形态学变化，即凋亡（Apoptosis）。凋亡是机体为维持内环境的稳态而产生的一种细胞自主性死亡过程，它是由种属之间非常保守的基因（例如Bcl-2家族、 Caspase家族、抑癌基因P53等）调控的。细胞在一些应激过程中，线粒体膜电势改变且通透性增加,细胞色素C（Cytochrome c, Cyt C）、凋亡诱导因子（Apoptosis inducingfactor, AIF）等从线粒体中释放到细胞质中，从而改变了线粒体上凋亡相关蛋白（例如Bax、 Bcl-2等）的表达量，并且进一步形成凋亡体活化Caspase-9等。同时，细胞凋亡还可以在细胞受到死亡信号的“攻击”时发生。细胞凋亡往往是单个细胞，或者是在一部分细胞中非同步进行。凋亡的形态学变化是细胞质密度增加，并且由细胞膜的翻转形成小泡，包裹凋亡遗骸形成凋亡小体。神经肽Y（Neuropeptides Y，NPY）是由36个氨基酸残基组成的多肽，包含有酰胺化的C-末端和大量的酪氨酸残基。NPY主要分布在中枢神经和外周器官中，成熟的NPY被酶切割后的活性分子与相应的受体结合后发挥其功能。其主要的生理功能是调节神经递质的释放；影响微生物-脑-肠轴，例如运动性、分泌物和血流量；调节免疫系统活性；抑制疼痛在脊髓和脑干中的传播等。此外还有研究表明NPY可以诱导血管平滑肌细胞的凋亡，并且可以影响肝细胞和视神经细胞等的凋亡活动。既然NPY对微生物-脑-肠轴有一定的影响，而且NPY还参与某些细胞的凋亡活动，那么NPY是否会影响肠上皮细胞的凋亡呢？如果NPY影响肠上皮细胞的凋亡，那么其具体机制是什么？目前未见相关研究报道。因此本实验首先用不同浓度的TNF-α处理Caco-2细胞，不同时间点后，通过MTT、DAPI染色法和流式细胞术检测TNF-α对Caco-2细胞凋亡的影响，建立Caco-2细胞凋亡模型；通过流式细胞术检测NPY预处理对TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的影响；通过蛋白质免疫印记检测NPY预处理对TNF-α诱导的Caco-2细胞中凋亡标志性蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2、Cyt C等表达量的变化，以确定NPY抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的机制；最后添加NPY受体特异性抑制剂，用流式细胞术检测Caco-2细胞凋亡率变化，从而更进一步确定NPY抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡的机制。实验结果表明，与NT组相比较，30ng/mL的TNF-α处理Caco-2细胞24h后能显著抑制Caco-2细胞的增殖，并且同时诱导细胞发生凋亡，凋亡率高达54.50%。10nM的NPY对TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡有抑制作用。在此过程中TNF-α组与NT组相比较Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9以及Bcl2的表达量降低，Bax、CYTC的表达量增加；NPY+TNF-α组与TNF-α组相比较Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9以及Bcl2的表达量增加，Bax、Cyt C的表达量降低。在Caco-2细胞膜表面的NPY受体有Y1、Y2、Y4、Y5，并且在NPY抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞凋亡过程中明显发生变化的受体是Y1，加入Y1受体特异性阻断剂BIBP3226后，与NPY+TNF-α组相比较BIBP3226+NPY+TNF-α组的凋亡率增加。以上研究表明，NPY通过与Caco-2细胞膜上的Y1受体介导了下游凋亡信号通路，从而抑制了TNF-α诱导的Caco-2细胞的凋亡。