论文部分内容阅读
背景及目的:急性肝功能衰竭(ALF)病情进展迅速,死亡率高,严重危害广大劳动人民的身体健康的。ALF目前临床上无特异的治疗方法,肝移植因为各种因素临床上无法得到广泛使用。因此,寻找适合我国国情的治疗方法有着重大的意义。急性肝衰竭发病各种机制十分复杂。近些年由内毒素诱导以TNF-α为核心的炎症反应在ALF发生发展过程中的作用受到高度重视,TNF-α通过激活TNF受体激活多重凋亡途径,加速肝细胞凋亡,导致肝功能衰竭。相关文献表明ALF有明显的微循环障碍,凝血酶的激活在ΑLF微循环障碍中发挥关键作用。FGL2凝血酶原酶是一种非经典凝血途径的促凝因子。研究发现在正常肝组织中未表达或少量表达,而在急性肝衰竭中FGL2呈中高度表达。因此减轻或阻断FGL2及TNF-α表达可为急性肝衰竭的治疗提供新的思路。银杏是我国特有的植物,EGB系银杏叶经过萃取的物质目前临床上主要用于治疗心脑血管疾病,其具有改善微循环、清除自由基等作用。但对急性重型肝炎的作用尙未见报道。本研究旨在通过构建小鼠急性肝衰竭动物模型,用不同浓度EGB进行干预,观察FGL2蛋白、肿瘤坏死因子、肝酶的表达水平,探讨EGB对D-氨基半乳糖(D-Gαl N)联合脂多糖(LPS)构建的小鼠急性肝衰的保护机制,同时为急性肝衰竭的治疗提供新的思路和方法。方法:1.模型的建立及实验的分组:将昆明种小鼠(SPF级)50只适应性饲养7d后,随机分成空白、模型、银杏叶提取物低、中、高剂量5组。空白对照组10只,造模前7天每日腹腔予以氯化钠注射液注射。模型组用D-GαIN 350mg/kg和LPS 30μg/kg同时腹腔注射构建急性肝衰竭。银杏叶提取物干预各组EGB低剂量组50mg/kg、EGB中等剂量100 mg/kg、EGB高剂量200 mg/kg,每组各10只,每天予以腹腔内注射EGB,共7天,于第7天上午予以D-Gαl N 350mg/kg和LPS 30μg/kg同时腹腔注射,于注射后5小时后麻醉,开腹腹主动脉采血、摘取肝脏,供检测使用。2.检测指标:2.1肝组织病理学检查:经过包埋、切片等处理,后经过HE染色经过普通光学显微镜下观察肝病理组织结构变化情况.。2.2免疫组化测定肝组织FGL2蛋白表达。2.3 TNF-α检测采用ELISΑ法(试剂为上海罗氏生物制药有限公司产品)。2.4血清学检查:采用全自动生化分析仪检测ΑLT、ΑST。结果:1.模型组肝组织病理表现大片坏死及炎症细胞侵润,免疫组化检测肝组织FGL2蛋白高度表达,与空白组对其血ALT,AST,和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)升高差异显著(P<0.01),急性肝衰竭模型构建成功。2.1银杏叶提取物能够降低的肝衰竭小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),以及下调炎性因子中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(P<0.01)。2.2病理学分析表明银杏叶提取物能够改善急性肝衰竭时肝组织坏死程度以及肝组织FGL2蛋白的表达。结论:银杏叶提取物对构建的急性肝衰竭模型有一定的保护作用,可作为一种治疗ALF的潜在候选药物。