双孢菇凝集素(ABL)是双孢蘑菇中的抗营养因子之一,为主要潜在过敏原,轻者可引起皮肤、胃、肠道部位的过敏反应症状,重者可致哮喘发作、过敏性休克,危及生命甚至死亡。由于目前针对预包装食品标签上过敏原信息的标注规范尚不完善,所以食品过敏原检测技术在避免含有过敏原的食品进入流通领域,从而降低过敏事件的发生中起着至关重要的作用。目前,检测过敏原的方法主要包括:生物共振技术、质谱技术、免疫学检测技术、聚合酶链式反应技术,这些方法各有其优缺点。由于现存的检测方法存在诸多不足,因此极为迫切的建立一种简便灵敏的检测方法。核酸适配体被誉为“化学抗体”。它是通过指数富集配体的系统进化技术(SELEX)获得的,能以高亲和力和强特异性与靶标分子结合的单链寡核苷酸序列,具有稳定的二级结构和特殊的三维构象。本研究利用消减-SELEX法筛选ABL的核酸适配体,进而以适配体作为特异性识别探针,以纳米金为指示剂,开发一种适体-纳米金比色法检测ABL的新型检测方法。采用消减-SELEX法筛选ABL核酸适配体。本文依据双孢菇凝集素作为糖蛋白,利用其疏水作用可以吸附到酶标板上的特性,将其固定到固相基质,从而制定了筛选双孢菇凝集素核酸适配体的策略。本试验人工合成一段两端各20nt引物序列,中间为40nt随机碱基序列的寡核苷酸文库。将寡核苷酸文库与消减靶标(牛血清白蛋白)孵育后,再与目的靶标(ABL)孵育,形成ABL-ssDNA复合物,保留在孔上,通过加热变性收集结合靶标的ssDNA,用乙醇沉淀法回收单链并以此为模板进行PCR扩增。应用链霉亲和素磁珠法制备次级文库,共进行13轮筛选得到适配体群。将终轮筛选产物克隆测序获得43条序列,其中包含多条高频序列。通过对序列进行生物信息学分析后,挑选出6条候选适配体,采用酶联适配体法进行亲和力和特异性鉴定,结果表明,适配体seq-41为最优适配体。基于核酸适配体和纳米金变色效应开发出可视化检测ABL的方法。采用柠檬酸钠还原法合成纳米金,单分散的纳米金溶液呈现酒红色,适配体与纳米金粒子在静电引力的作用下相互结合,从而保护纳米金抵抗盐诱导,防止聚集变色。由于ABL适配体可与ABL特异性结合,当溶液中存在ABL时,ABL通过竞争作用将原本与纳米金结合的适配体争夺下来,裸露的纳米金颗粒在高盐浓度作用下发生团聚,溶液由红色变为蓝紫色。在最优实验条件下,ABL浓度与A620/A520呈现良好的线性关系,其回归方程为y=0.4146x+0.4307(R2=0.9964),线性范围为0.08～1.70μg/mL,检出限为0.062 μg/mL。通过特异性实验表明本方法对ABL具有较强特异性。经加标回收试验显示该法在食品基质中的回收率为92.4%～105.3%。以上研究结果表明该检测方法具有操作简便、高灵敏性和特异性的优点,能够为食用菌和植物中过敏原的检测提供新的参考,同时为过敏防控及脱敏食品的开发提供技术支持。