天山云杉体细胞胚成熟与萌发培养的技术研究

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天山云杉体细胞胚成熟与萌发培养的技术研究,为实现云杉属树种的体细胞胚大规模繁殖及工厂化生产提供实验依据和理论基础。以天山云杉成熟合子胚为外植体所诱导的14个株系中,挑选体细胞胚发生数量较好的4个株系(T6,T36,T43,T48)为试验材料,4种不同成熟培养基(BM4、MSG、1/2BLG+3%蔗糖和1/2BLG+3%麦芽糖)、不同接种量(100、150、200 mg的胚性愈伤组织)、不同浓度的(1.9、3.8、7.6、19、38μmol·L-1)ABA(脱落酸)与类似ABA等因素为体细胞胚成熟的培养条件,以及对体细胞胚、裸子合子胚和种子的幼苗形态特征的比较,筛选出最佳的天山云杉体细胞胚成熟与萌发条件。主要结果如下:1)天山云杉14个株系诱导体细胞胚结果表明,不同株系在同一成熟培养基上成熟体细胞胚的数量存在差异;其中4个株系及其接种量对体细胞胚形成数量影响的结果表明,不同株系及其接种量对体细胞胚成熟数量有一定的影响,形成的成熟体细胞胚数量也存在差异,当接种量为100 mg时,T36株系的体细胞胚成熟数量最高,为3470±546个,显著高于其他接种量和株系(P<0.05)。2)在4种不同成熟培养基上,均形成了体细胞胚,在1/2BLG+3%麦芽糖培养基上,形成的体细胞胚数量高于其他培养基,分别为2044个(T6株系)和2282个(T36株系),且与其他培养基差异显著(P<0.05)。3)不同浓度的ABA对天山云杉体细胞胚成熟数量的影响无显著差异(P>0.05),当ABA浓度为1.938μmol·L-1时,其体细胞胚成熟的平均数量为28502913个,其中以ABA的浓度为7.6μmol·L-1时,处理效果相当较好,获得的正常体细胞胚平均数量为2913个,高于其他处理。4)不同浓度ABA与三种类似ABA进行体细胞胚成熟的对比研究,结果表明,不同浓度的(A、B、C)三种类似ABA对体细胞胚成熟数量的影响均无显著差异(P>0.05),(B)类似ABA的体细胞胚成熟的平均数量高于对照ABA。说明(B)类似ABA可以替代ABA。5)将不同浓度ABA与三种类似ABA对体细胞胚成熟数量的相关性分析,结果表明,不同浓度ABA与三种类似ABA影响下所获得的成熟体细胞胚数量之间显著相关关系。6)将体细胞胚、裸子合子胚和成熟种子萌发的小植株进行对比,结果表明,种子幼苗的发育相对快,比体细胞胚和裸子合子胚幼苗更具生长优势。裸子合子胚的幼苗高度(根、颈部、叶)高于体细胞胚,但之间无显著差异(P>0.05)。体细胞胚与裸子合子胚子叶的平均数量一致,两者间无显著差异(P>0.05),多数幼苗子叶数量为78个。综上所述,天山云杉体细胞胚成熟培养中,T36(株系)胚性愈伤组织的接种量为100 mg,添加7.6μmol·L-1的ABA及75%PEG4000、3%麦芽糖,并添加750 mg·L-1的L-谷氨酰胺及50 mg·L-11 L-天冬酰胺的1/2BLG培养基是体细胞胚成熟培养的最佳成熟培养基。ABA与三种类似ABA对比研究中,由于(B)类似ABA对体细胞胚成熟数量高于对照ABA,所以可以替代ABA。天山云杉体细胞胚的萌发培养中,无添加任何植物生长调节剂,含有铁盐、有机成分、蔗糖、7.5%PEG4000、活性炭和L-谷氨酰胺组成的BMG-2培养基是体细胞胚萌发培养的最佳萌发培养基。体细胞胚的再生小植株与裸子合子胚的小植株在形态上相近一致。
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