珍菊降压片是由野菊花、珍珠层粉及芦丁三味中药和氢氯噻嗪与盐酸可乐定两种西药成分组成的中西药物复方制剂,是临床上治疗轻中度原发性高血压的常用药物之一。近年来,因中西药物不合理配伍使用引发的药效降低甚至出现毒性反应的报道屡见不鲜,中西药物配伍后的有效性和安全性越来越受到关注,而大部分中西药物复方制剂的确存在着基础研究不足的缺陷,无法提供其中西药物配伍后增(存)效减毒的科学依据。因此,我们拟通过采用现代药理实验方法、药物安全性评价手段、基因芯片检测技术,对珍菊降压片的药效活性及作用靶器官、安全性进行系统研究和客观评价,同时通过拆方研究,研究其中西药物配伍增(存)效减毒的实验依据,探讨珍菊降压片的“安全、有效”及组方中中西药物配伍的合理性,为临床针对性地合理用药提供科学依据,并对中西药物复方制剂的研究开发进行理论指导。本课题主要包括以下七部分的研究内容：一、珍菊降压片中西药物配伍的降压作用研究选用自发性高血压大鼠(SHR),灌服珍菊降压片(简称：复方。下同)133、200、300mg/kg,以及复方组分中相应剂量中药、西药,观察和比较单次或多次给药对动物血压的影响。结果显示,珍菊降压片单次和多次给药,对SHR的高血压均具有明显的降低作用,降压幅度及起效时间与摄入药物剂量呈明显的正相关。其降压活性主要源于西药部分,但加入中药后,可减小其降压起始剂量,缩短起效时间,延长降压持续时间,增强降压幅度。表明珍菊降压片组方中中西药物配伍后具有一定的增效作用。二、珍菊降压片中西药物配伍对高血压相关基因表达的影响选用ICR小鼠,灌服复方280mg/kg,以及复方组分中相应剂量的中药、西药,连续给药7天后取血制备含药血清,检测经含药血清处理的ECV-304人脐静脉内皮细胞周期变化,并抽提其RNA,作基因芯片检测分析。结果显示,珍菊降压片的作用机制主要是调节高血压相关候选基因的表达,表现出多靶点的作用特点,并且表现出不同于单用中药、西药的作用靶点,提示中西药物配伍后发挥出不同于单独使用中药、西药的作用。三、珍菊降压片中西药物配伍对中枢神经系统的影响选用ICR小鼠,灌服复方280、1120、4480mg/kg,以及复方组分中相应剂量中药、西药,观察对中枢神经系统的影响。结果显示,珍菊降压片大剂量口服给药,受试动物自发性活动下降,与戊巴比妥钠阈下催眠剂量有协同催眠作用,可延长睡眠时间,说明珍菊降压片具有显著的镇静作用。此作用主要源于组方中的西药部分,加入中药后,对源于西药的镇静作用无明显的影响。四、珍菊降压片中西药物配伍对心血管系统、呼吸系统的影响选用Beagle犬,灌服复方60、240、960mg/kg,以及复方组分中相应剂量中药、西药,观察对血压、心率、心电、呼吸频率和幅度的影响。结果显示,珍菊降压片大剂量口服给药可使受试动物收缩压、舒张压、心率和呼吸频率下降,以上作用主要源于组方中的西药部分,西药部分还明显延长PR间期,有一定的房室传导障碍。加入中药后,可显著增强其降压活性,延长降压时间,具有一定的协同降压作用,与主要药效学活性研究结果相吻合,同时可以明显抑制源于西药部分的PR间期延长。表明珍菊降压片中西药物配伍具有一定的增效减毒作用。五、珍菊降压片中西药物配伍的急性毒性研究(最大给药量测定)选用ICR小鼠,一次性灌服35%复方40ml/kg,以及复方组分中相应剂量的中药、西药,观察其急性毒性反应。结果显示,珍菊降压片灌胃给药对小鼠的最大给药量为14g/kg,为人体临床单日使用剂量的140倍(以体表面积计),未见明显毒性反应,灌胃给予相应剂量中药、西药亦未见明显毒性反应。六、珍菊降压片中西药物配伍的长期毒性研究选用Wistar大鼠,灌服复方0.2、0.8、3.2g/kg,以及复方组分中相应剂量的中药、西药,每日1次,连续26周,停药后观察8周。每日观察受试动物的一般活动状况,每周称体重和食耗量一次,在给药13周、26周和停药8周时,在各组中分别取1/3动物,雌雄各半,取全血作血液学检测,分离血清作血清生化学检测,采集尿液作尿生化检测,摘取脏器作肉眼大致观察及脏器湿重与脏器系数测定,同时选取主要器官作组织形态学镜检。结果显示,珍菊降压片长期大剂量灌服,可导致受试动物脂质及离子代谢紊乱,肝、肾器官组织形态及功能轻度受损,体重自然增长率下降,中枢神经系统功能抑制,其影响程度与受试药物的摄入剂量及时间有关,但上述肝、肾受损和代谢紊乱症状均是可逆的,停药后就能逐步恢复正常。珍菊降压片口服安全用药剂量为0.2g/kg,为临床日使用剂量的2.8倍。珍菊降压片长期大剂量灌服产生的上述不良反应主要源于其中的西药部分,加入中药,可明显对抗或部分改善源于西药的不良反应。七、珍菊降压片中西药物配伍的肾毒性分子机理研究选用长期毒性研究连续给药13周Wistar大鼠肾脏,采用基因芯片技术检测各给药组动物肾脏表达谱的变化。结果显示,珍菊降压片可引起大鼠肾肾脏基因表达水平发生改变,其中凋亡相关基因Casp3、钙离子调节蛋白基因Calm2、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路相关基因等表达的改变,提示珍菊降压片长期大剂量给药可导致大鼠肾脏出现损伤,肾脏钙离子水平发生改变,MAPK信号传导通路激活或使肾脏细胞肥大,细胞外基质积聚,最终导致肾小球硬化和肾肾小管间质纤维化。珍菊降压片影响肾脏基因表达改变主要源于西药部分,且后者的剂量大小与基因表达变化程度呈正相关。加入中药后,在一定程度上,可以降低西药部分所引起的基因表达水平的改变,维持长期用药大鼠肾脏基因表达谱的稳定,此作用的发挥与西药的剂量相关。通过以上药效学、毒理学、作用机理等多方面的深入研究,可以确定珍菊降压片是安全有效的,其组方中的化学药物是其发挥疗效并产生不良反应的主要成分,但通过配伍中药成分,可以有效地增强其药理作用,并显著降低不良反应。实验结果充分证明了珍菊降压片的组方发挥了中西药物各自的特点和优势,为其组方的科学合理性提供了实验依据,也说明了中西药物复方制剂的优越性和良好发展前景。