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伏马菌素B1（Fumonisin B1，FB1）主要是由串珠镰刀菌、层生镰刀菌等镰刀菌属产生的水溶性次级代谢产物，主要污染玉米，小麦及其他谷物，也是伏马菌素（Fumonisins）家族中毒性最强的，能够导致马脑白质软化症，猪肺水肿，人的原发性肝癌，食道癌等。真菌毒素检测是保障食品安全的重要环节，为了精确定量真菌毒素，各种检测方法已经建立，如气相色谱法，高效液相色谱法，酶联免疫分析等。其中免疫学检测是基于抗原抗体特异性结合的免疫分析技术，具有简便快速、廉价和便于高通量筛选等优点。包括真菌毒素在内的小分子因其分子量，表位单一，不能同时结合两个抗体，因此免疫检测小分子主要是竞争模式，其需要将小分子与载体蛋白（BSA，OVA等）偶联制备检测抗原或者与标记分子偶联制备竞争抗原。这个过程需要专业的操作人员，及复杂的分离纯化过程，特别是有机溶剂的引入易造成对操作人员伤害和环境污染。本实验以FB1为研究对象，采用噬菌体随机十二肽库，以FB1单克隆抗体3F11为靶分子，应用生物淘选及分子克隆技术，生物合成了异源性FB1检测抗原。基于生物合成的FB1检测抗原，建立了玉米中FB1的酶联免疫检测方法。其次，分别以抗FB1单克隆抗体和多克隆抗体与FB1形成的复合物为靶分子，采用负筛选的方法，淘选噬菌体随机十二肽库，为筛选抗小分子抗原抗体复合物多肽，建立非竞争免疫检测小分子提供参考，主要研究结果如下：1.采用噬菌体淘选技术，获得了7种能特异性竞争结合3F11的模拟表位，分别命名为F1，F3，F4，F7，F15，F17，F22。采用间接竞争Phage-ELISA，建立了基于F1，F3，F4，F7，F15，F17，F22的标准曲线，IC50分别为0.422±0.021ng/mL，0.534±0.024ng/mL，0.464±0.031ng/mL，0.351±0.023ng/mL，0.875±0.059ng/mL，0.405±0.022ng/mL，0.312±0.025ng/mL。以F1为研究对象，建立了基于噬菌体展示FB1模拟表位PVDF膜基质法检测FB1，检测阈值为2.5ng/mL，可裸眼直接判断结果。2.采用PCR技术，克隆了7种FB1模拟表位，成功构建了pMAL-F1-MBP，pMAL-F3-MBP， pMAL-F4-MBP， pMAL-F7-MBP， pMAL-F15-MBP，pMAL-F17-MBP，pMAL-F22-MBP7个原核表达载体，转化至TB1中，经0.3mMIPTG诱导表达，获得了生物合成FB1检测抗原：F1-MBP，F3-MBP，F4-MBP，F7-MBP，F15-MBP，F17-MBP，F22-MBP。经间接竞争ELISA分析，结果显示只有F1-MBP，F15-MBP能与FB1竞争结合3F11，IC50分别为2.15±0.13ng/mL，1.26±0.08ng/mL。3.以生物合成的FB1检测抗原F1-MBP为研究对象，对比分析了pH，盐离子强度，甲醇浓度以及热处理对F1-MBP和人工抗原FB1-BSA免疫学性能影响，结果显示两者免疫学性能基本无差异。建立了基于F1-MBP的间接竞争ELISA标准曲线和IC50为2.15±0.13ng/mL，与FB1-BSA（IC50为21.39±1.15）相比，灵敏度提高了约10倍。同时建立了基于F1-MBP膜基质检测FB1，检测阈值为2.5ng/mL，与FB1-BSA相比灵敏度提高了10倍。分别用以上两种方法和传统的商业化ELISA试剂盒检测30份玉米样品，结果显示两者之间无显著差异，相关性良好（R2=0.98）。4.采用噬菌体随机十二肽库，分别以抗FB1单克隆抗体与多克隆抗体和FB1形成的复合为靶分子，利用负筛选的方法，经过三轮筛选，获得了23个阳性克隆，经测序发现23个阳性克隆都有多个插入片段。