背景：系统性红斑狼疮(systemic lupus erythcmatosus, SLE)是一种常见的自身免疫性疾病,可引起皮肤、血液、肾脏、神经系统等多系统损害,以T、B淋巴细胞活化,大量自身抗体生成,补体激活,免疫复合物清除障碍为特征。狼疮肾炎(Lupus Nephritis, LN)是SLE最常见和最严重的临床表现,肾衰竭是SLE死亡最常见的原因。SLE的发病机制目前尚不明确,目前一般认为其发病是遗传、感染、药物、雌激素水平、饮食等多种因素共同作用于机体产生的异常炎症性免疫反应。过去对SLE的研究多集中于适应性免疫方向,近年来随着人们对固有免疫认识的不断深入,固有免疫在自身免疫性疾病中的作用越来越受到重视,研究发现固有免疫和适应性免疫均参与SLE发病机制。固有免疫又称为非特异性免疫,能快速识别并清除入侵机体的病原微生物,被认为机体防御的第一道防线,参与固有免疫的细胞包括巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞、中性粒细胞和上皮细胞等。固有免疫细胞通过模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs)识别病原体上的病原相关分子模式(Pathogen associated molecular patten, PAMP)吞噬病原体,进而启动有效的免疫应答。NOD样受体(NOD-like receptor, NLR)为近来研究较多的模式识别受体,NLR属于胞浆型,NOD样受体3(NLRP3)和NOD样受体1(NLRP1)是调节炎性体活化及组装的两个重要受体。在感染等因素诱导下,NLRP3和NLRP1炎性体通过凋亡相关点状蛋白(apoptosis associated speck like protein containing a CARD, ASC)招募半胱氨酸酶1前体(pro caspase-1),活化caspase-1,形成NLRP3炎性体(?)NLRP1炎性体,Caspase1进一步将IL-1和IL-18前体裂解为有活性的IL-1β和IL-18,参与炎症反应和调节免疫应答反应。以往对NLRP3、NLRP1炎性体的活化机制及其效应的研究主要集中在固有免疫细胞中,在SLE中的研究尚不多见,故对NLRP3、NLRP1炎性体组分的深入研究将进一步阐明SLF的发病机制,为治疗提供新靶点。目的：检钡JNLRP3、NLRP1炎性体信号通路相关分子在SLE及正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)、粒细胞(granulocyte)、狼疮肾炎(Lupus nephritis, LN)肾组织及正常肾组织中的表达水平,比较其差异性,并检钡NLRP3、NLPR1炎性体组分在糖皮质激素治疗前后的变化,探讨NLRP3、 NLRP1炎性体信号通路在SLE炎症反应中可能的作用。方法：1.详细收集39例SLE患者和31例正常对照者的临床资料,分离PBMC和粒细胞。2.采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)技术检测NLRP3、NLRP1炎性体在SLE及正常对照组PBMC、粒细胞中mRNA的表达水平,比较其差异性；分析NLRP3、NLRP1炎性体组分与SLE病情活动指标的相关性；并检测下游炎症因子IL-1β mRNA的表达水平。3.检测SLE患者初次治疗前后(泼尼松60mg/d) NLRP3、NLRP1炎性体组分的表达变化。4.采用免疫组化的方法检测NLRP3、ASC、IL-1β在LN肾组织及正常肾组织中的表达情况。结果：1. NLRP3、NLRP1炎性体组分的表达水平1.1SLE组与正常对照组PBMC、粒细胞中NLRP3、NLRP1炎性体组分及下游分子IL-1β的表达1.1.1半定量RT-PCR结果显示,SLE患者PBMC中NLRP3mRNA表达水平显著低于正常对照组(0.425±0.242vs0.834±0.357),有统计学差异,P-0.0035；NLRP1mRNA表达水平显著低于正常对照组(0.504±0.096vsl.398±0.729),有统计学差异,P=0.0002; Caspase-1mRNA表达水平显著低于正常对照组(0.2205±0.1164vs0.8352±0.2030),有统计学差异,P=0.0002；ASC mRNA表达水平显著低于正常对照组(0.6874±0.3166vs1.246±0.6848),有统计学差异,P=().035。1.1.2实时定量RT-qPCR结果显示,SLE患者PBMC中NLRP3mRNA表达水平显著低于正常对照组(0.641±0.551vs1.320±1.023),有统计学差异,P=0.0009；NLRP1mRNA表达水平显著低于正常对照组(0.604±0.384vs1.260±0.619),有统计学差异,P=0.0001;Caspase-1mRNA表达水平显著低于正常对照组(1.126±1.028vs2.598±1.777),有统计学差异,P=0.0300；IL-1βmRNA表达水平显著低于正常对照组(1.033±0.899vs2.017±0.516),有统计学差异,P=0.0357。1.1.3SLE患者粒细胞中IL-1β mRNA表达水平显著低于正常对照组(1.767±1.370vs0.8019±0.6836),有统计学差异(P=0.0408)。1.2LN患者肾组织中NLRP3、ASC、IL-1β炎性小体的表达与正常’肾组织相比,NLRP3炎性小体在LN肾组织中染色强度明显降低,且着色强度与肾脏病理类型有关,其中Ⅱ型狼疮肾炎。肾组织NLRP3着色最深,III型着色次之,IV型着色最浅。ASC、IL-1β炎性小体在狼疮肾组织中表达,其中在II型肾组织中表达最多,在Ⅲ型和Ⅳ型狼疮肾组织中表达较Ⅱ型降低。2. NLRP3、NLRP1炎性体组分间的关联分析结果显示SLE患者PBMC中NLRP3mRNA表达水平与Caspase-1呈正相关(r=0.7405,P<0.0001),与IL-1βmRNA呈正相关(r=0.6085,P=0.0053),与NLRP1mRNA呈正相关(r=0.7055,P<0.0001)；NLRP1mRNA表达水平与Caspase-1呈正相关(r=0.8010,P<0.0001),与IL-1βmRNA呈正相关(r=0.4745,P=0.0053); Caspase-1mRNA表达水平与IL-1βmRNA呈正相关(r=0.5175,P=0.0010)。3.SLE患者NLRP3、NLRP1炎性体组分mRNA的表达水平与反映疾病活动临床指标间的相关性分析3.1与SLEDAI的相关性分析SLE患者PBMC中NLRP3mRNA表达水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.3959,p=0.0205)；NLRP1mRNA表达水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.4113,p=0.0174)；ASC mRNA表达水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.4860,p=0.0087)；Caspase-1mRNA表达水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.3989,p=0.0215),IL-1βmRNA表达水平与SLEDAI无显著关联。3.2与抗ds-DNA抗体的关联分析SLE患者PBMC中NLRP3mRNA表达水平与抗ds-DNA抗体呈负相关(r=-0.5493,p=0.0011); NLRPlmRNA表达水平与抗ds-DNA抗体呈负相关(r=-0.4077,P=0.0281); Caspase-1mRNA表达水平与抗ds-DNA抗体呈负相关(r=-0.4002,P=0.0284), ASC、IL-10mRNA表达水平与正常对照组相比无明显差异。3.3与抗AunA抗体的相关性分析SLE患者PBMC中NLRP1mRNA表达水平与抗AunA抗体呈负相关(r=-0.3357,p=0.0486),Caspase-1mRNA表达水平与抗AunA抗体呈负相关(r=-0.3699,p=0.0372);IL-1β mRNA的表达水平与抗AunA抗体呈负相关(r=-0.3544,p=0.0465), NLRP3、ASCmRNA表达水平与正常对照组相比无明显差异。4.糖皮质激素对SLE患者PBMC中NLRP3、NLRP1炎性体组分表达水平的影响糖皮质激素治疗后,NLRP3、NLRP1、Caspase-1、IL-1β mRNA恢复高表达水平,有统计学差异,(P=0.0237、P=0.0436、P=0.0252、P=0.0148)。结论：1.SLE患者PBMC中NLRP3、NLRP1、Caspae-1炎性小体较正常对照组呈低表达,且经泼尼松治疗后恢复高表达水平,IL-1β在SLE患者粒细胞中低表达,提示NLRP3、NLRP1炎性体组分参与SLE发病机制。2.SLE患者NLRP3、NLRP1炎性体表达水平与病情活动指标(SLEDAI.抗ds-DNA抗体、抗AnuA抗体)呈负相关,提示NLRP3、NLRP1炎性体表达水平可作为SLE病情活动程度的指标,推测可能是SLE治疗的新靶点。3.与正常肾组织相比,NLRP3炎性小体在LN肾组织中低表达,且表达水平与肾脏病理类型相关,由Ⅱ型LN到Ⅳ型LN表达水平逐渐降低,与外周血PBMC中表达趋势一致,提示NLRP3信号通路参与LN肾损害的发生。背景类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以侵犯四肢关节为主要临床表现,以关节滑膜炎为主要特征的慢性炎症性自身免疫性疾病,其病因不明,病程及预后差异大,目前已证实RA是基因、环境多种因素共同作用的结果。固有免疫和适应性免疫均参与RA发病机制。NLRP3、NLRP1炎性体是启动固有免疫及适应性免疫的关键NOD受体,通过结合蛋白ASC结合Caspase-1前体,使其活化剪切形成有活性的Caspase-1形式,活化的Caspase-1使IL-1β前体以IL-1β形式成熟和释放,介导炎症反应发生。对NLRP3、NLRP1炎性体活化机制及其效应的研究主要集中在固有免疫细胞,在RA中的研究尚不多见。目的本研究主要是通过探索RA患者PBMC和粒细胞中NLRP3、NLRP1炎性体的表达及其与临床指标间的相关性分析,初步探讨NLRP3、NLRP1炎性体信号通路在RA发病机制中的作用。方法1.详细收集36例RA患者和30例正常对照者的临床资料,分离PBMC和粒细胞。2.采用RT-qPCR方法检测NLRP3、NLRP1炎性体在RA及正常对照组PBMC、粒细胞mRNA的表达水平,比较其表达差异性；分析NLRP3、NLRP1炎性体组分与抗CCP抗体、RF、ESR的相关性；并检测下游炎症因子IL-1βmRNA内表达水平。结果1.NLRP3、NLRP1炎性体组分的表达1.1RA患者与正常对照者PBMC中NLRP3、NLRP1炎性体组分的表达RA患者PBMC中LRP1、Caspase-1mRNA表达水平低于正常对照组(0.9441±0.6233vs1.414±1.023,0.8690±0.8496vs1.344±1.676),有统计学差异,P值分别为0.0457、0.0273; NLRP3、ASC、IL-1β mRNA表达水平与正常对照组相比无显著差异。1.2RA患者与正常对照组粒细胞中NLRP3、NLRP1炎性体组分的表达RA患者粒细胞中NLRP3、Caspase-1、ASC mRNA表达水平显著低于正常对照组(0.761±0.789vs1.627±2.110,0.611±0.411vsl.123±0.837,0.528±0.298vs0.887±0.742),有统计学差异,P值分别为0.0489、0.0064、0.0249。2.RA患者PBMC中NLRP3、NLRP1炎性体组分表达水平与抗CCP抗体、RF、ESR的相关性分析RA患者PBMC中NLRP1mRNA表达水平与抗CCP抗体呈明显负相关(r=-0.3674,P=0.0354),与RF呈显著负相关(r=-0.4189,P=0.0332),与ESR无明显关联；IL-1β mRNA表达水平与RF呈明显负相关(r=-0.3948,P=0.0340)结论1.NLRP1、Caspase-1炎性小体在RA患者外周血PBMC中表达下调,NLRP3、 ASC、Caspase-1在RA患者粒细胞中表达下调,提示NLRP3、NLRP1炎性体可能作为保护性分子参与RA免疫机制。2.NLRP1表达水平与抗CCP抗体、RF呈负相关,提示NLRP1炎性体表达水平与RA病情严重程度相关,推测可能是RA治疗的新靶点。