前期研究发现，我们构建的小鼠口腔癌模型，原发灶在异常增生时期即有散在的播散肿瘤细胞(DTC)进入骨髓和淋巴结，并随癌生成发展逐渐增多，最终在淋巴结形成转移灶，但骨髓中仍处于休眠状态。这和临床上口腔癌转移主要在晚期，且以淋巴结转移为主相似。因此我们假设在口腔癌发生的早期即中重度异常增生时期，原发灶细胞就随机的播散到转移地，随后转移地不同的微环境影响了细胞的增殖和休眠，最终被动形成了淋巴转移的靶向性。　　目的:(1)体外培养及观察Balb/c小鼠口腔癌淋巴道转移模型中重度异常增生及高分化鳞癌时期原发灶细胞的生物学特性，为下一步研究播散肿瘤细胞提供细胞学基础。(2)获取正常Balb/c小鼠及免疫缺陷的Balb/c裸鼠的骨髓及淋巴结四种微环境，初步观察及探讨不同微环境对原发灶细胞生长的影响及其机制。　　方法:(1)收集小鼠口腔癌模型中重度异常增生及高分化鳞癌时期舌部组织，组织块培养法及酶消化法培养原发灶细胞，利用胰酶消化时间差，去除成纤维细胞。将分离纯化后的上皮细胞用于后续实验。(2)相差显微镜及透射电镜观察细胞的形态及其超微结构。免疫组化染色法检测各种细胞中Pan-CK、Vim、CD44及ESA的表达。(3)Transwell小室建立微环境与原发灶细胞共培养体外模型，分为5组:原发灶细胞单独培养组（对照组），原发灶细胞+小鼠骨髓共培养组，原发灶细胞+小鼠淋巴结共培养组，原发灶细胞+裸鼠骨髓共培养组，原发灶细胞十裸鼠淋巴结共培养组。直接计数法分别于24h、48h、72h、96h、120h、144h检测原发灶细胞的数量。　　结果:(1)本实验建立的培养条件下中重度异常增生及高分化鳞癌原发灶细胞培养成功率可达100％，最长分别可传至40代及80代，最长体外生存天数为103天及212天。(2)相差显微镜下中重度异常增生原发灶细胞形态及生长方式与正常上皮相似，高分化鳞癌细胞更具异质性。透射电镜下发现高分化鳞癌细胞出现细胞膜形态学改变，中重度异常增生细胞膜形态变化介于正常及高分化鳞癌细胞之间。(3)免疫组化结果显示中重度异常增生及高分化鳞细胞Pan-CK、Vim、CD44及ESA阳性表达率与正常上皮细胞无差异(P＞0.05);(4)共培养计数结果显示，不同微环境对中重度异常增生及高分化鳞癌时期原发灶细胞生长影响相似。裸鼠淋巴结微环境中原发灶细胞数均高于对照组(P＜0.05);裸鼠骨髓、小鼠骨髓及小鼠淋巴结微环境中原发灶细胞数均低于对照组(P＜0.05);　　结论:(1)可通过酶消化法培养小鼠中重度异常增生时期原发灶细胞，组织块法培养高分化鳞癌时期原发灶细胞，可经胰酶消化去除杂质细胞从而获得较纯的上皮细胞。(2)分离纯化后的原发灶细胞为不具有癌干细胞特性的上皮来源细胞。(3)不同微环境可能由于免疫因素（T细胞）及细胞因素（例如TGFβ1，TGFβ2）的不同，影响了肿瘤细胞的增殖或休眠，从而被动的形成了淋巴道转移的靶向性。