背景:心肌缺血是指由心肌灌注不足引起心脏能量代谢异常,功能局限性改变的过程,冠状动脉粥样硬化是引起心肌缺血的主要原因。随着经皮冠状动脉介入术（PCI）和冠脉搭桥术（CABG）的发展和普及,冠心病的死亡率有一定程度的降低,但仍是导致心血管疾病患者死亡的首要原因。近年来的研究表明,良好的冠脉侧枝循环可减小缺血和梗死灶面积,降低主要心血管事件发生率,然而现有研究对于冠脉侧枝生长的作用机制并未阐明。因此,如何促进冠脉侧枝循环的建立,了解其血管生成的作用机制对今后冠心病的治疗有着重要意义。钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）是丝氨酸/苏氨酸家族的一类蛋白激酶,主要表达于心脏。受Ca2+信号的调控,可以磷酸化多种蛋白底物。现有研究表明,在缺血再灌注模型中,CaMKⅡ过量表达以介导炎症反应和缺血再灌注损伤。但是CaMKⅡ在心肌缺血血管生成中的作用,目前国内外均未见报道。因此本课题主要研究CaMKⅡ在心肌缺血时的表达情况及其在缺血诱导的血管生成中的作用,同时进一步对其作用的分子机制进行详细论述。方法:实验一利用6-8周龄,体重18-20g的C57BL/6小鼠构建心肌缺血血管生成模型。心电图、心脏超声验证心肌缺血模型是否建立成功,HE染色观察心肌组织的病理变化,组织切片行vWF免疫组化染色、CD31和α-SMA免疫荧光染色观察模型是否有新生血管形成。实验二构建心肌缺血血管生成模型后,将小鼠分为四组,假手术组、模型组、模型+KN93（CaMKⅡ抑制剂）给药组、模型+KN92对照组。心脏超声评价小鼠心功能情况,实时定量PCR和Western blot检测CaMKⅡ的表达和磷酸化水平和VEGF的表达情况,免疫荧光染色检测各组心肌组织切片的CD31和Ki67的表达情况。实验三分离原代心脏微血管内皮细胞,构建内皮细胞缺氧模型后用KN93或KN92进行干预实验,采用MTT和transwell实验检测内皮细胞的增殖、迁移情况。同时检测VEGF和CaMKⅡ的表达量、CaMKⅡ磷酸化程度是否发生改变。结果:心肌缺血血管生成模型构建后,拉线时可见心电图Ⅰ、aVL导联ST段上移且无明显q波,心脏超声示心功能无明显变化（p>0.01）,免疫组化染色显示vWF、CD31和α-SMA染色血管数均明显升高（p<0.01）表明模型构建成功。与模型组相比,KN93给药组小鼠心肌组织中的CaMKⅡ磷酸化水平被抑制,VEGF的mRNA水平和蛋白水平明显降低（p<0.01）。与此同时,血管指标CD31和增殖指标Ki67的表达也明显减少（p<0.01）。KN92则对上述指标均无明显作用。细胞实验中,KN93可以明显抑制缺氧诱导的内皮细胞增殖和迁移（p<0.01）。Western blot实验表明KN93可抑制缺氧过程中VEGF的蛋白表达（p<0.01）,但是缺氧并不影响内皮细胞内CaMKⅡ总蛋白的表达（p>0.01）。结论:1)心肌缺血血管生成的过程伴随着CaMKⅡ表达和磷酸化程度的增高。2)体内外实验证明,CaMKⅡ通过介导VEGF的表达参与了心肌缺血血管生成的过程。3)缺血诱导的心脏CaMKⅡ总蛋白表达,其主要参与成分是心肌,而非内皮细胞。